6 . 计算荧光素/蛋 白 质 比(F/P ): F/P = F I T C 摩尔数/蛋白质摩尔数; F/P = 5 : 1〜6 : 1 最适于流式细胞仪使用。
辅 助 方 案 2 长臂生物素偶联抗体
遵 循 F I T C 偶 联 方 法(见辅助方案 1),替换以下试剂和步骤见特别说明。 附 加 材 料(其 他 材 料 见 辅 助 方 案 1 , 带 V 项 目 见 附 录 1)
V 琥珀酰亚胺乙酯标记缓冲液 10m g /m l 长 臂 生 物 素(long-armed Biotin, Z y m e d 公司)溶 于 D M S O ,临用前配制 1 . 用 与 F I T C 偶联相同的方法透析 1〜2m g /m l 的纯化抗体。在透析时,用琥珀酰亚胺 乙 酯 标 记 缓 冲 液 代 替 F I T C 标 记 缓 冲 液 。在 A 28。处 检 测 吸 光 度 ,确 定抗体浓度 ( = A 280 X 0.74 X 稀释倍数)。 2 . 每毫克抗体加入 IOm I 的 lOmg/m l 用 无 水 D M S O 配制的长臂生物素。室 温 孵 育 lh。 用 与 F I T C 相同的方法去除未结合的生物素(见辅助方案 1)。