一抗: lmg/m l 4 G 1 0 抗磷酸化酪氨酸单抗(UpstateBiotechnology) 或类似抗体 P B S 溶于 PBS/0. 0 2 % (m / V ) 叠 氮 钠 的 5 0 % (m /V ) 蛋 白 A -琼 脂 糖 悬 液(Pharmacia L K B ) 待分析的细胞 刺激物 2 X 和 I X 裂解液,冰冷 PI/P B S ,冰冷 lmmol/L 原银酸钠 I X S D S /上样缓冲液 封闭液 含 有 Tween 2 0 的 Tris 平 衡 盐(T B S T ) 二 抗 :碱 性 磷 酸 酶(A P ) -偶 联 的 抗 鼠 Ig (Promega 或 Pierce; l m g /m l 储存液以 1 : 7000 稀 释 于 T B S T 中) V 显影液 Combitip 分液管 连续分液器 振荡器平台或轨道旋转平台, 4°C 和室温 95〜110°C 水浴或类似仪器 0.2/x m 孔径的硝酸纤维素膜(Schleicher& Schuell) Whatman 3M M 滤纸