1.用 Kamovsky 固定液灌注。Kamovsky 固定液配方如下(以 100 ml 固定液的量计):
A 液:2 g 多聚甲醛溶于 60℃ 的 40 ml 水中,将 2~6 滴 1mol/L 的 NaOH 慢慢滴入直到溶液变清亮。 B 液:25% 戊二醛 10 ml 与 0.2md/L 二甲砷酸钠 50 ml 混合,pH 值为 7.3。
使用前将两种液体贮存于 4L,使用时再混合为 100 ml 固定液。不同灌注方法的详细步骤也不相同,这里所采用的灌注法既简单又可靠,它能最大限度地减少开始麻醉和有效固定之间的时间。蠕动加压泵(Watson-MarlowMHRE200) 为灌注提供动力(也有许多作者用静水压作为动力),插管完毕后立即导入固定液。起初灌注液保持相对低的流速,出现固定液起效的征兆(四肢和尾巴伸展)后的短时间内应逐渐増加流速。固定过程持续大约 10 min,固定 1 只成年大鼠需要 500 ml 固定液。不需要额外地监测灌流时的压力。
插管用 21 G 皮下注射针制成,在中点处折弯,尖端磨平。将一滴环氧树脂滴于针尖的一侧,然后把它涂抹在针尖周围,以利于导管经左心室尖的切口插入升主动脉。插管后用动脉钳将插管和心脏夹在一起并置于适当的位置。在手术和插管过程中,蠕动加压泵应保持低速持续运转,以防止气泡进入血管。当插管固定于适当的位置后,立刻剪开右心房,同时加快泵转动的速度,导入固定液开始固定。