标签: 植物原生质体制备
植物原生质体的制备可以用于:(1)由于其具有再生细胞壁,进行连续的细胞分裂并再生成完整植株的能力;(2)具有摄取外源大分子、细胞器,以及细菌,病毒的能力,因此是进行遗传操作,基因转移的好材料;(3)通过同种和异种植物的原生质体融合,可产生异核体,实现体细胞杂交,培育出新品种。
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1、取材 根据实验目的和条件选取不同的材料
2、分离原生质体
(1) 撕叶下表皮
(2)酶解 将撕去下表皮的叶片剪成小块,放在盛有5mL 酶液的小培养皿中,让去除下表皮的一面接触酶液,辅满一层,在25——28℃下酶解60——90 分钟
3、收集纯化
(1)用吸管将酶解液吸至5mL 离心管中,以600rpm 离心5 分钟以上,使原生质体沉降
(2)将上清(酶解液)回收,剩下原生质体及残渣于管底
(3)加氯化钙液约2mL,轻轻吹打均匀
(4)用注射器向离心管底部缓缓注入蔗糖约2—3mL,出现下部蔗糖液,上部原生质体悬浮液
(5)以600rpm 离心10 分钟,在两液相之间出现一条绿色带,便是纯净的原生质体
4、观察或培养
取少许原生质体于载片上,盖片观察其形态,或者将原生质体接种在培养基上进行培养,再生植株。
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