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淋巴细胞的分离和激化

标签: 淋巴细胞 分离 激化 细胞实验指南 第1章 第7节

本实验来源「细胞实验指南」 黄培堂 等译。

实验方法
  • 淋巴细胞的分离和激化
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 收集 10 ml 全血,加入不含防腐剂的肝素(0.2 ml 肝素/10 ml 全血)。

2. 在 15 ml 离心管中的肝素化血中加入 1 ml 6%葡聚糖,室温放置 20~30 分钟,沉降红细胞。

3. 从葡聚糖处理的血中小心收集红细胞上层的富含白细胞的血浆。

4. 富含白细胞的血浆室温 300 g 离心 8 分钟,沉降细胞。

5. 弃上清,细胞轻悬于 1 ml PBS 中。

6. 于室温下,用无菌巴斯德吸管小心将细胞悬液加在 5 ml Ficoll-Hypaque 之上。

7. 400 g 低温(4℃)离心 30 分钟,沉淀细胞。

8. 淋巴细胞在血浆和 Ficoll-Hypaque 层之间的白色浑浊条带中,小心取出贮存。弃红细胞沉淀。

9. 5 ml PBS 洗一次细胞,室温 250 g 离心 5 分钟,沉淀细胞悬于 3~5 ml 生长培养基中。

10. 全部细胞悬液转移至 T-25 组织培养瓶,加促细胞分裂剂。

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