5. 在样品管主混合液于沸水上温育的同时,将 Tag 聚合酶用 10 mmol/L Tris ( pH 7.6)稀释至 1 单位/μl;再将这种稀释酶液在冰浴上保存备用。
6. 将步骤 4 的样品冷却至室温,离心数秒钟,然后每一管加入 1 μl 稀释的 Taq DNA 聚合酶。
7. 设置两支对照管。在一支对照管中加入除了模板 DNA 的所有上述试剂;在另一支对照管设置呈阳性对照管,即加入已分析证实呈阳性的重组 λ 噬菌斑或菌落裂解液作为模板 DNA。阳性对照管的扩增片段应较实验管的扩增片段更大些为佳。这种较大的阳性对照片段的成功扩增,说明这种稳定 DNA 聚合酶具有扩增多大长度片段的能力。