检测支原体有两种不同的策略:第一种方法将在下述方案中述及,利用对 DNA 染色的荧光染料 Hoechst 33258, 它对细胞核周围(在细胞表面或胞质中)的特殊物质进行染色,可显示支原体污染;第二种方法是利用 DNA 探针识别细胞提取物中的 DNA 支原体特异序列,进行支原体污染的检测。对这个方案,照试剂供应商(fisher Scientific) 的说明进行。
实验步骤
1) 准备下列液体,然后除菌并冷藏。
无酚红的 HBSS
NaCl 8 g KCl 0.4 g CaCl2 0.14 g MgSO4•7 H2O 0.1g MgCl2•6 H2O 0.1g Na2HPO4•2 H2O 0.06 g KH2PO4 0.06 g 葡萄糖 1.0 g NaHCO3 0.35 g dH2O 1000 ml
Hoechst 1000x 贮存液
柠檬酸/磷酸盐缓冲液(2X)
0.1mol/L 柠檬酸 22.2 ml 0.2mol/LNa2 HPO4 27.8 ml 用柠檬酸或 Na2 HPO4 调节 pH 为 5.5。