标签: 病毒感染 细胞
病毒感染细胞实验可以用于:(1)将目的基因整合到大多数真核细胞。(2)将目的基因包装成病毒来感染细胞,从而得到表达满足实验需求。
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病毒包装的原理
质粒DNA为能转录出慢病毒遗传物质(RNA),但不能翻译出慢病毒的外壳及蛋白成分的载体质粒,其同时连有目的基因和报告基因,psPAX2为能表达慢病毒外壳的质粒,其表达产物可通过粘附机制更易穿过细胞膜, pMD2.G为慢病毒的膜蛋白质粒,通过 lipofectamine2000进行三质粒共转到靶细胞基因组中,宿主基因组在表达时,随宿主基因转录出的目的基因RNA与psPAX2、pMD2.G基因翻译出的蛋白组装为慢病毒。
在上述程序中提及的“第四天”收集病毒。在第五天再用该病毒感染靶细胞,病毒进入细胞后,其遗传物质RNA反转录出DNA,该基因再整合到靶细胞的基因组中,完成转染过程,因为质粒DNA只能转录出病毒RNA和表达目的基因却不能表达出病毒的外壳和膜蛋白成分,因此其不能像普通的病毒一样在宿主细胞能反复增殖,故对宿主细胞是无害的并且高效的将目的基因转然到靶细胞基因组中。
抑制剂处理细胞时间及方法
在研究信号通路时通常使用到各种激酶的抑制剂,文献里都是pretreat cell X min 或X h,提前处理细胞30分钟之类的,请问30分钟之后再给药时更换的培养基里还含不含有抑制剂?如果不含,仅处理30min能保证之后的24h或48h目标分子都是处于被抑制状态吗?如何还含有抑制剂为什么要提前处理,不能跟研究的药物一起加吗?
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