显色弱灵敏度低在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后,酶标板中孔的显色比较浅,即只有微弱的信号呈现。 出现该现象的可能原因: 1.产品过有效期,试剂没有按规定进行适当的保存。 2.试剂,标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。3. 少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。4. 洗板或者加样过程中,酶标物受污染失活。 5.孵育时间和孵育温度未达到实验要求。 6.洗涤液稀释倍数不符合要求,洗板次数过多,洗板冲击力过大,洗板浸泡时间过长。 7.底物溶液TMB显色时间太短。
样品是如何收集的,血清保存在哪里,保存了多久,上样时稀释了多少倍,有没有按照说明书去稀释样品,(有的试剂盒会给出尿液、血液、细胞上清不同的稀释试剂),操作过程是否正规,此外,最重要的是,你的检测的细胞因子是不是本身在血清中含量就很低,或者样本之间表达量的确没有差异。
严格正确稀释
任何事情都要从规范开始进行
(1)待测血清浓度过低,或者是稀释倍数过多(2)操作问题 (3)注意反应的条件,要严格控制。