(1) 12.5% 分离胶的配制。将 14.8 ml 分离胶用丙烯酰胺储存液、15.2 ml 电泳缓冲液、8.3 ml 水、0.4 ml 10% SDS、1 ml 3% 过硫酸铵(APS) 和 20 μ TEMED 混合。在电泳装置中灌制凝胶,上层以 0.1% SDS 覆盖,待其聚合。
(2) 浓缩胶的配制。将 1.3 ml 浓缩胶用丙烯酰胺储存液、2.5 ml 0.5 mol/L Tris-HCl ( pH 6.8)、6.1 ml 水、0.1 ml 10% SDS、0.1 ml 过硫酸铵(APS ) 和 25 μl TEMED 混合。在聚合的分离胶上灌制约 1 cm 高的浓缩胶,插上梳子。
(1) 第一向凝胶的制备。在一个放有搅拌子的 10 ml 烧杯中加入 1.38 g 超纯尿素、0.5 ml 10% NP40、125 μl 40% 两性电解质、0.49 ml 水,0.33 ml 等电聚焦丙烯酰胺储存液,这足够灌制 9 管凝胶。以封口膜盖住烧杯,搅拌混合 30 min 直至尿素完全溶解。不要加热丙烯酰胺溶液。
(2) 在混合丙烯酰胺溶液时,将制作模型用黏土平铺在干净的工作台上并用封口膜覆盖。将两根橡皮筋绕在试管架的外围并将试管架压入黏土中,同时在结核菌素注射器的前端加上一个 200 μl 的毛细管(离底部 11.5 cm 处作一记号)。
(3) 准备好凝胶溶液后,加入 4 μl 10% APS 和 5 μl TEMED,混匀,用注射器吸入丙烯酰胺溶液至液面刚过 11.5 cm 记号处。然后将毛细管通过固定在试管架外围的橡皮筋并固定在底端的黏土上,调整液面至刚刚为 5 cm 记号处,并检査是否有气泡。