标签： 酶切
酶切可用于：（1）获得粘性末端进行连接；（2）验证DNA重组是否成功；（3）验证质粒酶切位点是否有效。
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采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单，但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同（主要是盐离子浓度不同）或反应温度不同，这时可以采用如下措施解决：1）先用一种酶切，然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切；2）先进行低盐要求的酶酶切，然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求，加入第二种酶进行酶切；3）使用通用缓冲液进行双酶切。具体要根据酶的反应要求进行，尽量避免星号活力。
酶切反应中添加酶的量应控制在什么范围，为什么？
2 评论
酶切之后就可以直接电泳了吗？
PCR产物纯化之后又把产物作为模板再进行一次PCR是能够跑出条带的，然后就拿纯化产物进行酶切，用的是takara的HhaI，酶切1h，之后用那个loading buffer停止酶切，直接拿酶切完的产物和纯化的产物对比跑胶，结果连纯化的都没有条带，我想问一下，最后这个跑胶之前不用什么染色之类的吧？为什么连纯化的都没有条带呢？已经做了好几次了，都没有，郁闷啊！求大神指点！
1 评论
为什么经过酶切过后胶回收分子量变大了
片段之前的分子量是670，酶切后跑电泳也没问题 但是经过胶回收再跑电泳分子量就变成1000多了？
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orgazmo
觉得 很简单
除非酶活性有问题,不然很难出错
antaisui
觉得 一般
不错
凡凡凡123
还挺简单的。
HR微生物
觉得 简单
用好酶
肉丸001
挺简单，但出问题的时候会蛋疼死你
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