标签: 酶切
酶切可用于:(1)获得粘性末端进行连接;(2)验证DNA重组是否成功;(3)验证质粒酶切位点是否有效。
129 收藏 23588 阅读
采用粘末端连接必须对目的DNA分子和载体分子进行酶切以获得相应的粘末端进行连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。单酶切操作比较简单,但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同(主要是盐离子浓度不同)或反应温度不同,这时可以采用如下措施解决:1)先用一种酶切,然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切;2)先进行低盐要求的酶酶切,然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应要求,加入第二种酶进行酶切;3)使用通用缓冲液进行双酶切。具体要根据酶的反应要求进行,尽量避免星号活力。
酶切反应中添加酶的量应控制在什么范围,为什么?
2 评论
酶切之后就可以直接电泳了吗?
PCR产物纯化之后又把产物作为模板再进行一次PCR是能够跑出条带的,然后就拿纯化产物进行酶切,用的是takara的HhaI,酶切1h,之后用那个loading buffer停止酶切,直接拿酶切完的产物和纯化的产物对比跑胶,结果连纯化的都没有条带,我想问一下,最后这个跑胶之前不用什么染色之类的吧?为什么连纯化的都没有条带呢?已经做了好几次了,都没有,郁闷啊!求大神指点!
1 评论
为什么经过酶切过后胶回收分子量变大了
片段之前的分子量是670,酶切后跑电泳也没问题 但是经过胶回收再跑电泳分子量就变成1000多了?
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
酶切片段化法DNA建库试剂盒(VAHTS Universal Plus DNA Library Prep Kit for Illumina V2)(ND627)
南京诺唯赞生物科技股份有限公司
金牌会员 入驻 13 年
动物活体实验
上海吉凯基因医学科技股份有限公司
金牌会员 入驻 17 年
细胞实验外包/动物实验外包/分子实验外包/整体课题外包
威斯腾生物
金牌会员 入驻 14 年
PL6500 实验室冷藏箱
赛默飞世尔科技
血管生成(Angiogenesis)功能学实验
上海中乔新舟生物科技有限公司
钻石会员 入驻 15 年
实验室冷藏箱 HLR-310F
青岛海尔生物医疗股份有限公司
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号