标签: PCR 乙肝病毒 HBV
PCR法检测乙肝病毒(HBV)主要用于对病毒性肝炎的诊断、疗效观察及预防研究工作。
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一、标本处理
取混匀的血清20μl加20μl裂解液,搅匀后100℃沸水浴10分钟,最后15000rpm/min离心3分钟,取4μl上清待检。
二、加样及PCR
取反应液一管(使用前稍加离心),加4μl待检上清或阳性对照于底层反应液中,混匀后高速离心片刻,然后置PCR仪,设置程序94℃预变性2分钟,再按94℃/30秒、55℃/30秒、72℃/60秒扩增35个循环。
三、电泳与结果判断
取15μl 反应液,经2%琼脂糖凝胶电泳(5V/cm)30分钟后,在紫外灯下观察结果,若410bp处出现橙黄色带,则HBV为阳性。
1. 反应管中加好所有试剂后,应立即上机扩增,以免形成过多的二聚体。
2. 阳性模板可用阳性血清代替,处理方法同上。
3. 阳性模板及DNA提取液使用前需充分融化离心。
4. 反应也的表面为固体封盖剂,电泳取样时从反应管底部洗液。
5. EB为强致癌物,操作过程应注意防护。
6. 注意无菌操作,以免出现假阳性。
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