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方案24.2 冻存活检组织实验

标签: 活检组织冻存

通常难以利用较大的活检标本和由其提供的一切有价值的材料。在这些情况下,可通过冷冻保存组织。

来源:动物细胞培养:基础技术指南第五版

实验方法
  • 方案24.2 冻存活检组织实验
实验方法原理

切取肿瘤,将肿瘤块浸于 DMSO,然后分量冻存于液氮中。

实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤

一、材料


无菌 


 1. 活检标本 


 2. 1.2 ml 塑料冻存管(Nagle Nunc)


3. DBBS


4.  收集液


5.  二甲基亚砜(如果放在一个无菌容器中,为半灭菌的)

6.  器皿(解剖刀、解剖镊、培养皿等,同为原代培养)


二、操作步骤
1.  除去坏死组织、脂肪和纤维组织后,将肿瘤切成约 1~2 mm 的小块。同原代培养,将肿瘤块放入 DBBS 中浸洗。


2.  在每个冻存管中放入 4 或 5 个肿瘤块。


3.  将 1 ml 含有 10%DMSO 的生长培养液加入到放有肿瘤块的冻存管中,在室温下放置 30 min。


4.  将冻存管按 1°C/min 冷冻(见方案 20.1),然后将冻存管移入液氮罐。为了避免爆炸危险,不要将冻存管浸入液氮。

5.  将冻存管放在 37°C 温水中,使其融化(要有适当的预防措施,见方案 20.2)。


6.  用乙醇将冻存管彻底擦拭后打开,使肿瘤块沉淀后,吸出一半培养液。


7.  缓慢补充不含 DMSO 的新鲜培养液,轻轻摇动混合后,放置 5 min。


8.  用不含 DMSO 的培养液逐渐置换全部的培养液,然后将肿瘤块移入 Petri 培养皿,按常规原代培养方法进行操作,但每培养瓶中放入两倍多细胞。                                                                  

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