标签: 染料摄取法 细胞生存力测定
活细胞可以摄取二乙酰荧光素,并将它水解成荧光素,荧光素不能透过活细胞的细胞膜[RotmanandPapermaster,1966]。活细胞发出绿色荧光,而死细胞则不能。没有生存力的细胞也可能被碘化丙啶染色,随后发出红色荧光。细胞生存力可以用发绿色荧光的细胞的百分数来表示。该方法可用于CCD分析或流式细胞仪(见21.7.2节)。 来源:动物细胞培养:基础技术指南第五版
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材料 无菌 单细胞悬液 双醋酸荧光素,10ug/ml,溶于 HBSS 碘化丙啶,500ug/ml 非灭菌 荧光显微镜 滤光片 荧光素:激发 450/590 nm ,发射 LP 515 nm 碘化丙啶:激发 488nm ,发射 615 nm 操作步骤 1. 细胞悬液的制备与染料排斥法相同(见方案 22.1),但是生长液中不含酚红。 2. 以 1 : 10 的比例加入荧光素染料混合液,二乙酰荧光素的终浓度为 l ug/ml,碘化丙啶的终浓度为 50ug/ml。 : 3. 将细胞置于 37°C , 温育 10 min。 4. 将一滴细胞滴在载玻片上,盖上盖玻片,用荧光显微镜观察。
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