标签: 贴壁效率 细胞测定
以低密度接种细胞,温育直至集落形成,染色与计数集落 来源:动物细胞培养:基础技术指南第五版
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材料 无菌 生长液 400 ml 0.25% 粗制胰蛋白酶 10 ml Petri 培养皿,6 cm 20 个 试管或通用玻璃容器,稀释用 20 个 非无菌 血球计数板或电子计数仪 固定液:无水甲醇 100 ml D-PBSA 200 ml 染料:结晶紫 100 ml 滤斗和滤纸(过滤染料) 操作步骤: 1. 胰蛋白酶消化细胞(见方案 13. 2),制成单个细胞悬液。 2. 当细胞正在消化时: (a) 在培养皿底面编号; (b) 计算好每稀释步骤所需培养液(图 21.10)。培养液要足以有重复三次的最终稀释量。 3. 当细胞变圆并开始浮起时: (a) 在含有血清或胰蛋白酶抑制剂的培养液中分散单层; (b) 细胞计数; (c) 将细胞稀释至: i) 2X104 个/ml 加人两个 25 cm2 培养瓶中,用于常规维持。 ii) 稀释液最高浓度为 2X103 个/m l。 iii) 将 ii) 稀释成 5 种浓度,200,100, 50,20 和 10 个/ml。
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