标签: 电阻 电子细胞计数
用胰蛋白酶消化单层培养,或从悬浮培养中取样;准备一张盖玻片,将细胞加到血细胞计数板的小室内。在显微镜下计数细胞,计算细胞浓度。
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材料 无菌:细胞培养物、D-PBSA、0. 2 5 % 粗制胰蛋白酶、生长培养基 非无菌:计数杯
操作步骤 1. 用胰酶消化单层培养的细胞,或从悬浮培养中收集样品。充分地混匀细胞悬液使之尽量分散成单个细胞。 2. 在一个 25m l 的烧杯或任一样品杯中,用计数液体以 1 : 50 稀释细胞悬液至 20m l。使用自动分散器(图 5. 2 0 ) 会加速稀释,会使重复性更好。 注意事项 快速地分配计数溶液会产生气泡,当这些气泡通过小孔时会被当作细胞统计在内。因而计数溶液在开始计数前应静置一会儿。如果溶液被先分配,然后再加入细胞,则出现气泡的可能性就会很小。 3 . 充分地混匀细胞悬液,然后移入带孔管子的底部,确保能覆盖住小孔,样品杯中的外部电极应位于计数溶液的液面之下。 4 . 检査程序设置: (a) 临界值设定(细胞大小的下限通常为 7. 0um ); (b ) 检测体积(通常 0.5 ml); (c) 背景去除(视需要而定); (d ) 溶解设定(例如,若 20 ml 的 D-PBSA 中有 0.4 ml 被计数,则设为 50)。 5. 检査可见的模拟显示 (a) 确保所有的细胞都在设定的临界范围之内; (b ) 检査细胞活力或细胞碎片(通过曲线的肩部或正常临界值下限以下的直方图来指示)。 (c) 检査细胞是否聚集成团(即出现在正常大小范围之上的颗粒)。 6 . 启动计数程序。 7 . 当计数周期完成时,细胞大小的分布情况将出现在模拟显示屏上(图 21.4)。 转换到数字显示屏后就可以得到每毫升的细胞数。
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