标签: 分离鸡胚实验 方案12.2
动物细胞培养:基础实验指南 由于鸡胚比同期的小鼠胚胎大,故较易分离。与小鼠胚胎一样,鸡胚可提供间充质细胞原代培养,用于细胞增殖分析,用作饲养层细胞,并可作为病毒繁殖的基质。由于鸡胚体积较大,故也较易分离出单一器官以产生特殊类型的细胞,如肝细胞、心肌和肺上皮细胞。应用鸡胚也要符合动物法规(例如在英国),使用超过孕期一半的胚胎要有许可证
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孵箱(非 C02)
操作步骤 1. 在湿润的环境中于 38.5℃:条件下孵卵,每天转动 180°,然鸡卵孵育也需要 20?21 天,但它们的发育阶段不同于鼠胚。分离整个胚胎进行细胞培养,需在大约第 8 天时进行。若分离器官则大约在第 10?13 天(在英国第 10 天是要许可证的最后期限)。 2. 用 70% 乙醉棉签消毒鸡卵,钝端向上放于小烧杯内(图 12.4a)。 3. 用无菌镊打破卵壳(图 12.4b), 剥离卵壳直到气旗的边缘(图 12.4c)。 4. 重新消毐镊子后(浸入乙醇,烧干乙形,于无菌的 BSS 屮冷却)用镊子剥离白色的壳膜,露下面的绒毛嵌丧膜(CAM)及血管(图 12.4d、图 12.4e)
5. 用弯镊子刺破绒毛尿褒膜(图 12.4f),轻轻夹住头部下方,提出胚胎(图 12.4 g、图 12.4 h),不要完全闭合镊子,避免颈部被切断,将中指垫在镊子下,用它限制食指的压力(图 12.4 g)。 6. 将鸡胚放入直径 9 cm 含 20 ml DBSS 的培养皿中(图 12.4i),等待进一步解剖和培养(见方案 12.7)。
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