标签: 乙醇 DNA 含量
测定DNA含量可以用于:(1)进行基因片段连接实验。(2)进行转化转染之前的质粒浓度测定。
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一、培养细胞的 DNA 含量的测定
制备单细胞悬液于 200μ l 的 PBS 缓冲液中; 加入 2ml 预冷的 70%乙醇,4℃保存;
1. 取单细胞悬液 1——2×106 个细胞于 PBS(PH=7.2)缓冲液中;
2. 300g 离心 5 分钟,弃上清,反复两次;
3. 重悬细胞于 0.5ml PBS 缓冲液中;
4. 将细胞悬液放置于 2——3ml 冷 70%乙醇中,混匀,保存于4℃,至少30 分钟。 在 4℃条件下可保存 2——3 周。
2、新鲜组织的 DNA 含量的测定
1. 用 200mg 湿重组织用机械法制成单细胞悬液;
2. 500g 离心 5 分钟;
3. 弃上清,重悬于 10ml 染色- 去污剂中;
4. 再过滤,用 200 目的筛网或 70——80μm 的筛网过滤;
5. 上机检测。
3、石蜡包埋组织切片的 DNA 含量的测定
1. 从石蜡包埋切取切片 50 μ m 厚,2——3 片,制成单细胞悬液;
2. 用 PBS 缓冲液洗涤,500g 离心 5 分钟,弃上清;
3. 加入 PI 液 1ml 室温避光 30 分钟;
4. 调整细胞浓度为 1×106/ml;
2. 将乙醇作为固定剂时,乙醇应预冷至 0——4℃;
3. 细胞在固定时,固定剂应缓慢滴入细胞悬液中,使固定剂的浓度缓慢增 加,并不断震摇,以免细胞成团(特别是用乙醇固定时) .
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