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我做的BL21(DE3)感受态,要不是转化效率太低,要不就是没有结果,检测感受态菌液,菌没有死,但就是转不出来,请问各位大师这是什么原因?

zhangniu007  提问于 2014-12-08

共3个答案

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    detaibio 回答于 2015-11-03

    大肠杆菌蛋白表达试验中,感受态的制备主要与以下几个因素有关:
    1.细菌的生长状态:实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞(一般通过检测OD600来控制。DH5α菌株 OD600为 0.5 时细胞密度是 5 × 107/ml );
    2.所有操作均应在无菌条件和冰上进行;
    3.经 CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加, 24小时达到最高,之后转化率再下降(这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的);
    4.化合物及无机离子的影响:在 Ca2+的基础上联合其他二价金属离子(如 Mn2+或 Co2+)、 DMSO 或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高,一般来讲 CaCl2 /CoCl2法及二甲基亚砜(DMSO)等可以提高转化率很多倍(100-1000);
    5.所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率;6.质粒的大小及构型的影响:用于转化的应主要是超螺旋的 DNA ;
      

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    bssci 回答于 2015-06-28

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    viviank 回答于 2014-12-08

    1、你可以买一组高效感受态试试,如果好的,那就说明你的感受态有问题。
    2、把你做的感受态给其他人用用,最好是师兄师姐,如果他们能做出来,你做不出来,那就是你的操作问题。
    3、感受态制备,建议用氯化钙法,很好用。也比较简单。制备的时候,要点是:动作要很轻柔,做完以后也试试看,做个空白对照。
      

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