关键步骤有哪些,需要注意的问题是什么?
具体步骤是:1、细胞爬片2、4%多聚甲醛固定10 min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)3、PBS漂洗5 min4、0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)5、PBS漂洗2次,每次5 min6、1%BSA封闭30 min7、加入1%BSA稀释的一抗,于37℃杂交2 h8、PBS漂洗2次,每次5 min9、加入1%BSA稀释的二抗,于37℃杂交1 h10、PBS漂洗2次,每次5 min11、5 ug/ml DAPI染色2 min12、抗淬灭封片剂封片抗淬灭封片剂2.5% DABCO (w/v)50mM Tris(pH8.0)90%甘油0.25g DABCO9ml甘油0.5ml 1M Tris(Ph8.0) 0.5ml ddH2O70℃溶解,-20℃保存
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