标签： 细胞 伤口愈合 培养
细胞伤口愈合实验被研究者广泛应用和改进，用来研究各种实验条件比如基因敲除和化疗在细胞迁移和增殖中的作用。该实验的优势在于（1）操作简单（2）费用廉价（3）实验条件容易根据不同的目的改进。
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1.细胞在含有10%FBS的DMEM培养基中生长。
2.细胞以一定密度接种到24孔细胞培养板中，生长24小时后，单层细胞融合度应达到70-80%。
3.不要更换培养基。用新的1ml枪头轻轻的在单层培养细胞间划痕，划痕横穿过孔，枪头尽量与板孔的底部垂直，不要倾斜。这样产生的gap的距离才与枪头末端的外直径相等。Gap的距离可以选用不同型号的枪头调节。划痕在同一方向成一条直线。
4.在垂直与第一条划痕的方向制作另一条划痕，每孔划痕成十字交叉型。
5.划痕后，用培养基轻轻的清洗板孔2次，以去除脱落细胞。
6.每孔添加新鲜培养基。
7.（培养基中含有某些成分，如抑制/促进细胞迁移和/或增殖的化学物质）
8.细胞生长48小时（或根据时间需要）。
9. 1xPBS清洗细胞两次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分钟。
10. 1%的结晶紫（2%乙醇溶解）染色30分钟。
HUVEC做transwell迁移实验膜上没有细胞
最近在做transwell预实验，用的Millipore transwell小室，8um孔径，说明书说不用铺胶，每孔10万个细胞，试了不同的培养时间，用结晶紫或DAPI染色后，发现膜上都没有细胞，只有类似下图中的圆圈，看着也不是细胞，加了因子的实验组圆圈数量要比对照组多。初次做这个实验，不知道是什么原因，恳请高手帮我分析一下。
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神经小摩羯
觉得 难
挺好的实验
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