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细胞划痕实验

标签: 细胞 划痕 检测 迁移

细胞划痕实验可应用于:(1)检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力;(2)研究细胞基质和细胞间相互作用对细胞迁移的影响。

详细
实验方法
  • 划痕法
实验方法原理 创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法,也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”,在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口,以及比较图像以确定细胞迁移速率。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
一.准备:
所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)

二.流程:
1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
2.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。
3.第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。
4.用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
5.放入37度5%CO2培养箱,培养。按0,6,12,24小时取样,拍照。

下面是照片,细胞NIH3T3
0h


6h


12h


24h
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注意事项

1.划痕法测量适用的细胞范围较小,一般只适用于上皮细胞,纤维样细胞。


2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多。


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实验问答
(共15个问题)
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  • 丢丢diudiu

    丢丢diudiu

    3个月前 觉得很难

    学习学习

  • 方一生

    方一生

    3个月前 觉得一般

    实验步骤不难,但要注意PBS冲洗和划痕时的力度

  • 青萍之末1

    青萍之末1

    3个月前 觉得一般

    还可以

  • dgbia

    dgbia

    3个月前 觉得一般

    难度一般,记得pbs清洗,药物浓度要把握好

  • 陈二慧子

    陈二慧子

    3个月前 觉得一般

    操作难度不大,但需要做到严格无菌,同时还要掌握好划痕时的力度。

  • yangkaizeng

    yangkaizeng

    3个月前 觉得很难

    五种细胞,增殖速度差3倍,调统一密度真费事

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