最近在分离培养鸡胚的原代成肌细胞,细胞分离下来的时候状态不错,差速贴壁后一天换液时观察细胞状态还很好,在培养皿中长到60%左右密度。但是换液完第二天去观察细胞就发现细胞开始分化形成肌管,第三天观察细胞开始死亡,第四天,绝大部分细胞死完了。好几次实验都是这样,很纠结,培养基的血清浓度一直控制在20%,不知道是哪一步出错了。
个人是做鸡胚心肌细胞的,手上将近做了有千鸡胚了,之前是在老外拿到的protocol,我们夏天做的时候用冰盒预冷,离心同样4度预冷,操作时最大程度降低细胞代谢活力,成纤维差速45min去除。我的经验是请保证培养基,培养箱处于正常工作状态,你的细胞可能是老化了,说明离体后细胞活力降低了很多,确定你的操作与之前的一样,鸡胚用胰酶消化问题不大,我的心肌细胞同样用胰酶消化,每次37度8min,冰上预冷最后消化完预冷离心,确定操作问题不大,那就详细详细检查培养基,培养箱。原代细胞最好是gibco的血清以及新鲜培养基,国内还没有可以代替的产品!供参考!祝好!
我虽然没养过,但是师兄一直在做,他的经验就是鸡胚胚龄很重要,大龄的胸肌分化过度,不好消化。
会不会是成纤维细胞没有洗脱干净的缘故
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