标签: 双向免疫扩散法;抗血清效价
双向免疫扩散法可用于:(1)诊断疾病;(2)测定抗体的效价。
5 收藏 2454 阅读
将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板中的相邻小孔中,使两者互相扩散,当扩散到它们的浓度达当量点时(浓度相当)形成沉淀线。如果抗原-抗体的浓度合适时,沉淀线在两孔的中间。如抗体过量,沉淀线靠近抗原孔。如抗原过量,沉淀线靠近抗体孔。此技术可以测定抗血清的效价。
1. 将盛有3 ml生理盐水琼脂的小试管置水浴中熔化。
2. 将熔化好的琼脂小心倒入已调好水平的载玻片上,每块厚度为1 mm。
3. 琼脂凝固后,按模板打孔,孔内的琼脂如未被吸出则可用牙签挑出,中心孔为加抗原的孔,四周的6个孔为加抗体的孔,孔径3 mm,孔距4 mm。打孔后将玻片于酒精灯上烤背面(温度不宜过高,以不烫手为宜),使琼脂与玻片粘紧。
4. 将兔抗人IgG按二倍稀释法稀释成1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32的不同浓度。
5.从上到右到下到左的顺时针方向将不同稀释度的抗体定量加入周围五孔,第六孔加生理盐水作为对照(千万不要溢出或漏在琼脂胶上)。
6.小心将板放入湿盒内,置37 ℃温箱,经24 h扩散,第二天观察。
7.观察沉淀带的出现情况并画下来,在有沉淀出现的稀释抗原中,稀释倍数最大的一孔的抗原稀释倍数即为抗体效价。
2. 琼脂应在沸水浴中充分融化。一次配制较多琼脂液时应分装成20~50mL小体积。以避免多次再融化改变浓度。
3. 琼脂(糖)的浓度可视气温略加调整:夏天浓度可加大至1.2%~1.5%,冬天则可以用0.8%~0.2%。
更有优质直播、研选好物、福利活动等你来!
本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。
我的询价
询价列表
暂时没有已询价产品
手机验证
科研好物关注研选号