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人α2a,α2b干扰素检测实验

标签: ELISA 检测 人α2a α2b干扰素 实验

重组人α2a/α2b干扰素生产流程中不可缺少的一环是产品的质量监控,通常采用的是HEp-2/VSV或Wish/VSV系统检测干扰素的生物活性。此系统常由于VSV或细胞的影响而不够稳定,且检测周期较长。(来源:医学基础免疫学实验指导,主编金伯泉李恩善,第1 版,北京:世界图书出版社,1990)  

实验方法
  • 夹心法ELISA
实验方法原理 选用2种针对rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b分子不同表位的McAb,1种McAb作为包被抗体,另1种McAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为结合物,催化底物显色。根据标准品OD值绘制标准曲线,在标准曲线上查出待检标本的含量。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1.  向ELISA板中加入稀释好的包被抗体100 μl/孔,4 ℃  24~48 h

2.  洗3次,加入10倍连续稀释的待测标本(做4个稀释度即可)或倍比稀释的标准品(6个稀释度)100 μl/孔,37 ℃,1 h
    
3.  洗3次,加入稀释好的酶标抗体100 μl/孔,
37 ℃,45 min
    
4.  洗4次,加入配好的ABTS底物液100 μl/孔,
RT,30 min
             
5.  测410 nm OD
         
6.  绘标准曲线
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注意事项
1.  待检标本必须无污染,无溶血。
  
2.  标本稀释后加入ELISA板时,注意从低浓度向高浓度依次加入。
  
3.  结合物稀释液和底物缓冲液中禁止加入叠氮钠。
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