1、细胞冻存于-70-80℃保存半年左右是没有问题的,关键是用于冻存的细胞首先状态要好,然后进行程序性降温,4度1h,-20度2h,后转移到-80度。当然也可以使用程序降温盒(提前拿出来解冻)。2、DMSO的浓度10%左右为最好。3、复苏和冻存的程序怎样才能达到最好效果?复苏和冻存的总的原则是慢冻速溶,复苏时预先打开水浴锅37度,将冻存细胞取出立即溶解,加入培养基后离心五分钟,重悬细胞后置于细胞培养瓶中培养。冻存的程序见第一条答案。4、冻存液中的血清含量较高的话细胞冻存的效果会好一些,其实这个不是最关键的因素,最重要的是培养的细胞状态和冻存的程序。我们尝试过DMSO:培养基=1:9,DMSO:血清:培养基=1:2:7,DMSO:血清=1:9,细胞复苏之后状态都很好。
我有过搂主的经历!我分析可能有以下原因:1.冻存过程中是否出现问题:细胞的状态如何、细胞的离心速度、冻存液比例、(我们一般是10%DMSO+90%血清)等。2.冻存温度的问题:目前认为液氮温度(-196度)是比较实际和理想的,因为细胞细胞生命活动几乎停止,如果保存得当,可以保存到10年以上!如果-70左右保存细胞,短期内对细胞无明显影响,但随细胞冻存时间延长,生存率明显下降!有文献报道,-70冻存SNL(一种小鼠成纤维细胞),一个月内复苏,生存率90%,而一个月之后生存率下降到50%!我想着可能是你复苏后细胞生存率下降的真正的原因把!建议你及早转移到液氮罐中!祝你好运!
恩,关键还是慢冻快复的原则,阶梯型降温,快速复苏,-80半年是没有问题的,但是冻存细胞的状态得好啊,楼上举例的比例都是理想的可实现的,二楼说的也是对的,不排除此原因,我们常用的瞬转细胞-80即可但是也都是还要在液氮中~