我养的是肾癌caki和769p细胞,以前用(DMSO10%+20%FBS+70%基础培养基)冻存液保存,冻存过程按照标准逐级降温,细胞复苏后状态一直很好,复苏过程没有问题。但最近一段时间不知何故复苏后,细胞状态极差,caki细胞数目极少,估计不会生长的,769p细胞数目较多但细胞呈透亮状,并且复苏1天后培养基颜色仍未改变,不知何故?请求各位老师给予指导,不胜感激。
细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融,只要按着这个标准去做,一般细胞都不会受太大的损伤。你说细胞细胞在冻存后复苏一开始成活率还好,最近复苏不成功,考虑是冻存后保存的原因,是-80度还是液氮保?-80度保存是否由于经常开启导致温度经常波动?温度的经常性波动致使冻存细胞受到损伤,所以复苏不成功。
其实按理来说癌细胞应该会很好养的,我觉得你这应该是冻存液的问题,因为我们配冻存液是(DMSO10%+90%FBS)因为有足够的血清细胞才能在冻存的状态下存活。还有你冻存了多久?复苏了多少管?
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我的细胞最近也是复苏出现问题:复苏后第一天细胞贴壁,但是细胞伸展较差,虽然是贴壁,但是细胞大部分还是圆形的。当天不换液。第二天再观察发现,细胞已经飘起来了。用的是DMSO10%+FBS90%,细胞是U87细胞。
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