标签: 细胞原代传代培养
组织细胞培养技术已被广泛的用于细胞生物学、细胞遗传学、分子遗传学、分子生物学等领域的研究。组织细胞培养技术已被广泛的用于细胞生物学、细胞遗传学、分子遗传学、分子生物学等领域的研究。
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原代培养是直接从生物体获取细胞进行培养,由于细胞刚刚从活体组织分离出来,故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段,同时也为以后传代培养创造条件。最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上,加入培养基后进行培养。分散细胞培养则是将组织块用机械法或化学法使细胞分散。从胎儿或新生儿的组织分离到活性最好的游离细胞,经典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和胶原酶)消化细胞间的结合物,或用金属离子螯合剂(如EDTA)除去细胞互相粘着所依赖的Ca2+,再经机械轻度振荡,使之成为单细胞。
1. 严格进行动物皮肤消毒.使用三套器械取材。新生动物皮肤先用2%碘酊液消毒,成年鼠先用3%~5%碘酊液消毒后用75%乙醇消毒。
2. 严格进行无菌操作,防止细菌、真菌、支原体污染,避免化学物质污染。
3. 吸取液体前,瓶口和吸管进行火焰消毒;经火焰消毒后的吸管一定要用Hank’S液冷却。防止烫伤、烫死细胞。吸取液体时,避免瓶口和吸管接触碰撞。
4. 离心管入台前,管口、管壁应消毒。
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