比较生物测定引导的柑橘物种分级分离：来自酸橙叶的多酚富集组分的植物化学表征与纳米制剂在皮肤抗衰老中的应用

背景：皮肤衰老由氧化应激和紫外线（UV）暴露驱动，导致细胞外基质降解和皮肤弹性丧失。本研究旨在通过生物测定引导的方法鉴定最具生物活性的柑橘属物种，并评估其在皮肤应用中的潜力。方法：对甜橙（Citrus sinensis）、酸橙（Citrus aurantifolia）和柑橘（Citrus reticulata）叶的醇水提取物和乙酸乙酯部分进行抗氧化、酶抑制和多酚含量筛选。通过UPLC-PDA和LC-MS/MS对最具活性的部分进行表征，制成基于Span的纳米囊泡，并评估其理化性质和药物释放。使用人真皮成纤维细胞的体外划痕愈合实验和UVA诱导的光老化小鼠模型评估生物活性，并辅以分子动力学模拟。结果：酸橙的乙酸乙酯部分（CAE）在测试样品中表现出最高的生物活性。该部分显示出强抗氧化活性（DPPH IC50 = 3.53 ± 0.05 µg/mL），对弹性蛋白酶（91.3%）、胶原酶（92.0%）和酪氨酸酶（80.2%）有显著抑制，以及高总黄酮含量（110.49 mg芦丁当量/g）。CAE的植物化学分析初步鉴定出十四种化合物，主要为黄酮类，其中橙皮苷（30.4 mg/g）是主要成分。优化的纳米囊泡（184 ± 0.9 nm，PDI 0.10，EE% 75.0%）实现了橙皮苷的持续释放。CAE和CAEnp增强了成纤维细胞迁移，并在24小时加速伤口闭合（p < 0.05）。在体内，CAEnp改善了UVA诱导的组织病理学改变，并通过将p62/SQSTM1降低28.7%、Keap1表达降低至CAE治疗组的21%，以及增强Nrf2、ARE和NQO1表达分别提高54.1%、28.3%和57%来调节氧化应激相关标志物。分子动力学模拟支持橙皮苷与弹性蛋白酶稳定结合，并提示可能调节胶原酶的柔韧性。结论：通过比较生物测定引导分级分离鉴定出的酸橙多酚富集叶部分，表现出抗氧化、酶抑制、伤口愈合和光保护作用，尤其在纳米制剂后效果更佳。这些发现支持其作为天然局部抗衰老候选物的进一步开发潜力。