病例收集与筛选
识别常规病理实践中的MFT病例
从两家机构收集连续甲状腺切除术标本,通过组织学检查初筛和回顾性复查确诊MFT。
Prevalence and Histologic Features of Multifocal Fibrosing Thyroiditis in the Routine Pathology Practice
多中心回顾性队列分析,运用组织学、免疫组化和NGS验证,但无功能实验或动物模型。
甲状腺切除术标本(人类) 多灶性纤维化甲状腺炎病灶 甲状腺乳头状癌病灶
样本来源:意大利博洛尼亚和葡萄牙波尔图两家机构共1736例连续甲状腺切除术 MFT诊断标准:纤维化瘢痕样病灶,中心细胞稀少伴外周滤泡细胞异型性 BRAF V600E检测:IHC和/或NGS,所有检测病例均为阴性 NGS检测:15例进行28基因热点区域测序,未发现突变 数据统计:GraphPad Prism 8.0,Fisher精确检验和Mann-Whitney检验
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
识别常规病理实践中的MFT病例
从两家机构收集连续甲状腺切除术标本,通过组织学检查初筛和回顾性复查确诊MFT。
描述MFT的临床和组织学特征
提取患者年龄、性别、手术类型等临床资料,分析MFT病灶数量、大小、形态、分布及伴发甲状腺病变。
评估MFT中BRAF V600E突变和其他基因改变
对部分病例进行BRAF V600E免疫组化和NGS 28基因面板测序。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 免疫组织化学 | 抗BRAF p.V600E(VE1)小鼠单克隆一抗 | Roche | 760-509 |
| OptiView扩增试剂盒 | Roche | 860-099 | |
| OptiView DAB免疫组化检测试剂盒 | Roche | 760-700 | |
| BenchMark ULTRA自动免疫组化染色仪 | Ventana Medical Systems-Roche Diagnostics | -- | |
| DNA提取 | QuickExtract FFPE DNA提取试剂盒 | Epicentre | -- |
| DNA定量 | Qubit双链DNA BR检测试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| NGS测序 | Gene Studio S5 Prime测序仪 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| AmpliSeq Plus文库构建试剂盒2.0 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Ion Chef机器人 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| Ion 530芯片 | Thermo Fisher Scientific | -- | |
| NGS分析 | Ion Reporter工具(v. 5.18) | Thermo Fisher Scientific | -- |
| 统计分析 | GraphPad Prism 8.0 | -- | -- |
| 数字化切片查看 | CaseSlideView平台(InstantViewer 3.1) | 3DHISTECH | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 病例收集 | 样本来源、时间范围、样本数量 阅读提示:参见Materials and Methods中“Clinical Features and Histologic Evaluation of Patient Samples” |
| 组织学评估 | MFT病灶数量、大小、形态、位置;伴发甲状腺病变 阅读提示:参见Materials and Methods及Results中“Microscopic Features of Multifocal Fibrosing Thyroiditis” |
| 分子检测 | NGS检测的基因面板、覆盖度、突变阈值;IHC抗体克隆和检测平台 阅读提示:参见Materials and Methods中“Immunohistochemical Analysis”和“DNA Extraction and Next-generation Sequencing (NGS)” |