多重高清晰度聚合酶链反应检测儿童蜱传感染

Multiplex High-Definition Polymerase Chain Reaction Assay for the Diagnosis of Tick-borne Infections in Children

作者信息Lise E Nigrovic, Desiree N Neville, Laura Chapman, Fran Balamuth, Michael N Levas, Amy D Thompson, Anupam B Kharbanda, Derek Gerstbrein, John A Branda, Blake W Buchan, for Pedi Lyme Net
PMID37089773
发布时间2023-03
DOI10.1093/ofid/ofad121

实验完整度

中

前瞻性队列中的巢式病例对照研究,使用多重HDPCR检测全血样本,匹配对照组,但无独立实验干预或功能验证。

主要模型

儿童全血样本 莱姆病病例和匹配对照

重点核对

样本量为612例(306例莱姆病,306例对照) 匹配因素:症状、年龄组、性别、参与中心 检测方法:多重HDPCR检测板 样本处理:200µL全血核酸提取 结果解读:阳性对照和5个校准品

摘要

背景:肩突硬蜱可携带伯氏疏螺旋体以及其他引起人类疾病的病原体。在疑似莱姆病的儿童中,蜱传感染和合并感染的频率未知,这导致临床对最佳诊断方法的不确定性。方法:我们纳入了1至21岁因评估莱姆病而就诊于8个Pedi Lyme Net急诊科之一的儿童。我们选择了经血清学或临床诊断为莱姆病(游走性红斑或早期神经系统疾病)的病例,并按症状、年龄、性别和中心与无莱姆病的对照受试者进行匹配。我们使用多重高清晰度聚合酶链反应(HDPCR)检测板检测了诊断时采集的全血样本,以识别9种与人类疾病相关的细菌或原生动物病原体。我们比较了莱姆病儿童与匹配对照中蜱传合并感染的频率。结果:在612个选定样本中,594个(97.1%)具有可解释的多重HDPCR结果。我们鉴定了以下非伯氏疏螺旋体蜱传感染:嗜吞噬细胞无形体(2例)、查菲埃立克体(1例)和微小巴贝虫(12例)。莱姆病儿童比匹配对照更可能检出另一种蜱传病原体(15/297 [5.1%] 莱姆病病例 vs 0/297 [0%];差异,5.1% [95% 置信区间,2.7%–8.2%])。结论:尽管相当一部分莱姆病儿童检出了另一种蜱传病原体,要么一线莱姆病抗生素提供了充分治疗,要么合并感染是亚临床的,不需要特定治疗。需要进一步研究来确定儿童蜱传合并感染检测的最佳方法。关键词:儿童,合并感染,莱姆病,蜱传感染。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
在儿童中,蜱传感染(包括合并感染)的频率是多少?
核心机制
蜱传病原体与莱姆病共同传播,但机制未明确,可能涉及多种病原体同时感染。
主要证据
多重HDPCR检测显示5.1%的莱姆病儿童检出非伯氏疏螺旋体病原体,而匹配对照为0%。
研究意义
提示一线莱姆病治疗可能足够,但对非典型病例或治疗反应不佳者应考虑分子检测板。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

队列建立和样本采集

建立前瞻性队列,收集符合条件儿童的临床数据和生物样本。

从8个Pedi Lyme Net急诊中心招募1-21岁疑似莱姆病儿童,采集全血和血清,存储于-80°C。

2

病例和对照选择

选择莱姆病病例和匹配对照以比较蜱传感染频率。

基于临床表现和血清学诊断莱姆病,按症状、年龄组、性别和中心匹配对照。

3

多重HDPCR检测

检测全血样本中9种蜱传病原体。

使用ChromaCode HDPCR Tick-borne Panel检测,包括核酸提取和实时PCR。

4

统计分析和结果解释

比较莱姆病病例和对照中蜱传病原体检测频率。

计算比例差异和95%置信区间。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
EMAG assaybioMérieux--
ABI 7500 FastDx热循环仪Applied BioSystems--
多重HDPCR蜱传病原体检测板ChromaCode--
IBM SPSS软件IBM Corporation--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
样本采集
样本类型:全血;体积:200µL;存储温度:-80°C
阅读提示:Methods: Data Collection and Multiplex HDPCR Test
病例对照选择
病例定义:游走性红斑或早期神经系统莱姆病;对照匹配:症状、年龄组、性别、中心
阅读提示:Methods: Lyme Disease Case Definition and Nested Case-Control Study
HDPCR检测
检测板:ChromaCode HDPCR Tick-borne Panel;仪器:ABI 7500 FastDx;质量控制:阳性和阴性对照,5个校准品
阅读提示:Methods: Multiplex HDPCR Test
统计分析
软件:IBM SPSS 27.0;分析:比例差异和95%置信区间
阅读提示:Methods: Statistical Analysis