韩国严重发热伴血小板减少综合征病毒基因型对疾病严重程度、病毒载量和细胞因子的影响

Effect of Severe Fever With Thrombocytopenia Syndrome Virus Genotype on Disease Severity, Viral Load, and Cytokines in South Korea

作者信息Ji-Soo Kwon, Ji Yeun Kim, Choi Young Jang, Ju Yeon Son, Woori Kim, Taeeun Kim, Se Yoon Park, Min-Chul Kim, Seong Yeon Park, Hye Hee Cha, Hyeon Mu Jang, Min-Jae Kim, Yong Pil Chong, Sang-Oh Lee, Sang-Ho Choi, Yang Soo Kim, Sung-Han Kim
PMID39310272
发布时间2024-09
DOI10.1093/ofid/ofae508

实验完整度

中

前瞻性临床队列,涵盖70例患者,进行病毒载量动态监测(RT-PCR)、基因分型(系统发育分析)及17种细胞因子检测(多重微球免疫分析),并比较B型与非B型及存活与死亡患者的差异。

主要模型

SFTS患者外周血血浆样本 SFTSV基因型B和非B分离株

重点核对

患者来源:韩国5所大学附属医院 样本类型:外周血血浆 病毒载量检测:实时RT-PCR,检测S和M片段 基因分型方法:部分序列系统发育分析 细胞因子检测:17种细胞因子多重微球免疫分析

摘要

背景:严重发热伴血小板减少综合征(SFTS)是一种新出现的蜱传疾病,由大别班达病毒(SFTS病毒[SFTSV])引起。最近,已鉴定出至少6种不同的SFTSV基因型,其中A、D和F基因型在中国占主导地位,B基因型在日本和韩国占主导地位。本研究调查了在韩国流行的SFTSV基因型对疾病严重程度、病毒载量和细胞因子谱的影响。方法:我们前瞻性地纳入了2015年7月至2022年6月期间的70例SFTS患者。在住院期间连续采集血浆样本并进行分析。通过实时逆转录聚合酶链反应测量病毒载量。分析病毒基因组的部分序列以进行基因分型。通过多重微球免疫测定法测量17种细胞因子的血浆浓度。结果:在70个样本中,51个可以分型。B基因型占主导地位(80.4%),其他基因型不常见。B基因型与非B基因型之间的重症监护病房入住率(51.2%对50.0%)和死亡率(26.8%对40.0%)均无显著差异。初始病毒载量无显著差异(3.59对3.64 log copies/μL),而住院第3-4天测得的病毒载量在B基因型中往往高于非B基因型(3.83对1.83 log copies/μL,P = .07)。此外,与SFTS死亡密切相关的干扰素-α、白细胞介素10和干扰素-γ诱导蛋白10的血浆浓度无显著差异。结论:SFTSV B基因型是韩国流行的主要基因型,临床结局、初始病毒载量或细胞因子谱均无基因型特异性差异。关键词:细胞因子;基因型;严重发热伴血小板减少综合征;SFTS;病毒载量。我们分析了韩国流行的严重发热伴血小板减少综合征(SFTS)病毒的基因型。大多数分析病例被归类为B基因型。与SFTS致命结局相关的因素无基因型特异性差异。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
在韩国流行的SFTSV基因型是否影响疾病严重程度、病毒载量和细胞因子谱?
核心机制
文中未明确说明。研究未发现基因型特异性差异,但观察到B型患者白细胞计数和碱性磷酸酶水平较低。
主要证据
基于70例SFTS患者的前瞻性队列,其中51例可成功分型,B型占比80.4%。比较B型与非B型患者的临床结局、病毒载量和细胞因子水平,均无显著差异。
研究意义
SFTSV B型是韩国优势基因型,与疾病严重程度和病毒载量无显著关联,提示不同地区的基因型分布可能部分解释致死率差异,但宿主因素可能亦影响预后。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

患者入组与样本采集

获取SFTS患者的临床和实验室数据,为后续分析提供样本

从2015年7月至2022年6月在韩国5所大学附属医院前瞻性纳入确诊SFTS患者,入院后连续采集血浆样本并储存于-80°C。

2

病毒载量检测

量化患者血浆中的SFTSV病毒载量,并比较不同基因型间的差异

使用1步多重实时RT-PCR检测病毒S和M片段,以人β-actin为内参,基于体外转录RNA标准曲线计算拷贝数。检测限为4.3 copies/μL。

3

基因分型与系统发育分析

确定SFTSV的基因型,并分析不同基因型与临床特征的关联

提取血浆RNA,通过1步常规RT-PCR扩增S和M片段的部分序列,克隆后构建最大似然系统发育树,与512条参考序列进行比较。

4

细胞因子测量

评估不同基因型SFTS患者血浆中17种细胞因子的浓度是否存在差异

使用流式细胞微球阵列法(CBA)测量血浆中17种细胞因子,包括IFN-α、IFN-γ、IL-1β等,并通过流式细胞仪获取数据。

5

比较B型与非B型患者的临床结局

比较B型与非B型SFTS患者的疾病严重程度和死亡率是否有差异

从电子病历获取临床资料,比较两组在ICU入住率、死亡率、白细胞计数等实验室指标上的差异,并进行统计分析。

6

分析B型患者中存活与死亡患者的病毒载量和细胞因子动力学

在B型患者中,比较存活与死亡患者的病毒载量和细胞因子水平,以探索与死亡相关的因素

将B型患者按结局分为存活组和死亡组,比较两组在住院期间的病毒载量和细胞因子水平的变化趋势。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
QIAGEN RNA提取试剂盒Qiagen--
LightCycler多重RNA病毒预混液Roche Diagnostics--
AccuPower RocketScript RT-PCR预混液Bioneer--
T-Blunt PCR克隆试剂盒SolGent--
FACS CANTO II流式细胞仪BD Biosciences--
GraphPad Prism 9.1.2GraphPad Software--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
患者入组与样本采集
入组时间范围,患者入组医院,血浆样本采集方法
阅读提示:Materials and Methods: Study Population and Sample Collection
病毒载量检测
RT-PCR反应条件,引物和探针序列,检测限
阅读提示:Materials and Methods: Viral Load Measurement; Supplementary Table 1
基因分型
RT-PCR反应条件,引物序列,克隆方法,系统发育树构建方法
阅读提示:Materials and Methods: Genotyping; Supplementary Table 1
细胞因子检测
检测的细胞因子列表,试剂盒型号,流式细胞仪型号
阅读提示:Materials and Methods: Cytokine Measurement