患者入组与样本采集
获取SFTS患者的临床和实验室数据,为后续分析提供样本
从2015年7月至2022年6月在韩国5所大学附属医院前瞻性纳入确诊SFTS患者,入院后连续采集血浆样本并储存于-80°C。
Effect of Severe Fever With Thrombocytopenia Syndrome Virus Genotype on Disease Severity, Viral Load, and Cytokines in South Korea
前瞻性临床队列,涵盖70例患者,进行病毒载量动态监测(RT-PCR)、基因分型(系统发育分析)及17种细胞因子检测(多重微球免疫分析),并比较B型与非B型及存活与死亡患者的差异。
SFTS患者外周血血浆样本 SFTSV基因型B和非B分离株
患者来源:韩国5所大学附属医院 样本类型:外周血血浆 病毒载量检测:实时RT-PCR,检测S和M片段 基因分型方法:部分序列系统发育分析 细胞因子检测:17种细胞因子多重微球免疫分析
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取SFTS患者的临床和实验室数据,为后续分析提供样本
从2015年7月至2022年6月在韩国5所大学附属医院前瞻性纳入确诊SFTS患者,入院后连续采集血浆样本并储存于-80°C。
量化患者血浆中的SFTSV病毒载量,并比较不同基因型间的差异
使用1步多重实时RT-PCR检测病毒S和M片段,以人β-actin为内参,基于体外转录RNA标准曲线计算拷贝数。检测限为4.3 copies/μL。
确定SFTSV的基因型,并分析不同基因型与临床特征的关联
提取血浆RNA,通过1步常规RT-PCR扩增S和M片段的部分序列,克隆后构建最大似然系统发育树,与512条参考序列进行比较。
评估不同基因型SFTS患者血浆中17种细胞因子的浓度是否存在差异
使用流式细胞微球阵列法(CBA)测量血浆中17种细胞因子,包括IFN-α、IFN-γ、IL-1β等,并通过流式细胞仪获取数据。
比较B型与非B型SFTS患者的疾病严重程度和死亡率是否有差异
从电子病历获取临床资料,比较两组在ICU入住率、死亡率、白细胞计数等实验室指标上的差异,并进行统计分析。
在B型患者中,比较存活与死亡患者的病毒载量和细胞因子水平,以探索与死亡相关的因素
将B型患者按结局分为存活组和死亡组,比较两组在住院期间的病毒载量和细胞因子水平的变化趋势。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 病毒载量检测 | QIAGEN RNA提取试剂盒 | Qiagen | -- |
| LightCycler多重RNA病毒预混液 | Roche Diagnostics | -- | |
| 基因分型 | AccuPower RocketScript RT-PCR预混液 | Bioneer | -- |
| T-Blunt PCR克隆试剂盒 | SolGent | -- | |
| 细胞因子检测 | FACS CANTO II流式细胞仪 | BD Biosciences | -- |
| 统计分析 | GraphPad Prism 9.1.2 | GraphPad Software | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 患者入组与样本采集 | 入组时间范围,患者入组医院,血浆样本采集方法 阅读提示:Materials and Methods: Study Population and Sample Collection |
| 病毒载量检测 | RT-PCR反应条件,引物和探针序列,检测限 阅读提示:Materials and Methods: Viral Load Measurement; Supplementary Table 1 |
| 基因分型 | RT-PCR反应条件,引物序列,克隆方法,系统发育树构建方法 阅读提示:Materials and Methods: Genotyping; Supplementary Table 1 |
| 细胞因子检测 | 检测的细胞因子列表,试剂盒型号,流式细胞仪型号 阅读提示:Materials and Methods: Cytokine Measurement |