基因组组装与注释
获得近T2T质量的基因组序列,用于着丝粒比较分析。
利用PacBio HiFi和Hi-C技术组装茄子、非洲茄子、野生辣椒基因组,并进行基因和转座子注释。
Comparative centromere genomics reveals evolutionary divergence in Solanaceae genomes
包含基因组组装、CENH3 ChIP-seq、FISH、系统发育和共线性分析等多层级验证,并进行了功能与机制验证。
番茄(Heinz 1706) 辣椒(CA59) 茄子(Sm01) 非洲茄子(Sa01)
CENH3抗体特异性验证(辣椒源抗体与物种特异性抗体ChIP-seq一致性) 着丝粒边界划定依据CENH3 ChIP-seq峰和手动检查 FISH验证LTR反转座子和卫星重复在着丝粒的分布 基因组组装质量指标(BUSCO、contig N50) 共线性断点验证通过Hi-C接触图
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获得近T2T质量的基因组序列,用于着丝粒比较分析。
利用PacBio HiFi和Hi-C技术组装茄子、非洲茄子、野生辣椒基因组,并进行基因和转座子注释。
鉴定功能性着丝粒染色质区域并测量其大小。
使用辣椒CENH3抗体和物种特异性抗体对多个茄科基因组进行ChIP-seq,并分析CENH3富集峰。
比较不同物种着丝粒的序列组成,包括LTR反转座子和卫星重复。
利用EDTA和TRASH等工具分析着丝粒区的重复序列,并通过FISH验证。
评估着丝粒位置变化和断点分布模式。
构建基因组间共线性图谱,识别断点,并分析其在着丝粒区域的富集。
检测同一物种内不同个体间着丝粒位置和CENH3结合模式的变异。
比较多个茄子、番茄、辣椒品系的CENH3 ChIP-seq图谱,并鉴定着丝粒单倍型。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 基因组测序 | PacBio Sequel II平台 | Pacific Biosciences | -- |
| Hi-C文库制备 | Phase Genomics Proximo Hi-C试剂盒 | Phase Genomics | -- |
| Hi-C测序 | Illumina NovaSeq X Plus平台 | Illumina | -- |
| DNA质量检测 | NanoDrop分光光度计 | -- | -- |
| Qubit荧光计 | -- | -- | |
| DNA片段选择 | Pippin Prep系统 | Sage Science | -- |
| ChIP-seq文库制备 | Illumina TruSeq DNA样品制备v2试剂盒 | Illumina | -- |
| ChIP-seq定量 | KAPA Biosystems文库定量试剂盒 | KAPA Biosystems | -- |
| ChIP-seq测序 | Illumina NovaSeq 6000平台 | Illumina | -- |
| ChIP实验 | 蛋白酶抑制剂片剂 | Roche | 11,873,580,001 |
| 染色体标本制备 | 纤维素酶 | -- | -- |
| 果胶酶 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 基因组组装 | PacBio HiFi reads 质量与覆盖度、Hi-C覆盖度、组装软件参数 阅读提示:Methods: PacBio HiFi sequencing, assembling, and annotation |
| CENH3 ChIP-seq | 抗体(辣椒源性CENH3抗体)、叶片用量(约2g)、裂解和超声参数、测序平台 阅读提示:Methods: CENH3 ChIP-seq experiment |
| FISH | 探针序列(LTR和卫星重复)、标记物(488-5-dUTP)、杂交条件 阅读提示:Methods: Fluorescence in situ hybridization (FISH) |
| 共线性分析 | 比对的参考基因组(SL5)、断点定义阈值(>20 kb)、过滤条件 阅读提示:Methods: Genome-wide synteny construction; Identification and analysis of synteny breaks |
| 种内多样性分析 | 样本数量(如非洲茄子7个)、参考基因组(Sa01)、比对工具和参数 阅读提示:Methods: CENH3 ChIP-seq experiment; Results: Intraspecific centromere diversity |