宏基因组测序与组装
获取深海微生物群落的基因组信息
收集海水样本,提取DNA,进行宏基因组测序和组装,生成MAGs。
Abundant and metabolically flexible bacterial lineages underlie a vast potential for rubisco-mediated carbon fixation in the dark ocean
包含从宏基因组组装、物种聚类、代谢基因分析、丰度分布、全球分布到宏转录组表达的多层次证据,并进行了功能验证和机制验证。
海洋水柱宏基因组(OC1703A断面) 全球海洋宏基因组数据集 宏转录组(TARA Oceans等)
宏基因组样本的深度覆盖(平均约52 Gb/样本) MAGs质量标准(≥50%完整度,<10%污染) Rubisco基因鉴定的HMM和系统发育筛选 丰度计算的读段比对和覆盖度阈值(如95%相似性,≥50%覆盖度) 基因表达分析的阈值(至少50个表达基因,覆盖度≥50%)
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取深海微生物群落的基因组信息
收集海水样本,提取DNA,进行宏基因组测序和组装,生成MAGs。
鉴定编码Rubisco的基因组并分类其形式
对MAGs进行基因预测,使用HMM搜索和系统发育分析鉴定Rubisco序列,并划分形式。
探究Rubisco编码生物的代谢潜能
分析代表性基因组的代谢基因,如CBB循环、硫氧化、氮氧化和氢化酶基因。
测定Rubisco编码生物在断面和全球的丰度和分布
将宏基因组读段映射到代表性基因组,计算相对丰度,并分析全球分布。
评估Rubisco基因在自然环境中的表达情况
将宏转录组读段映射到基因组,计算基因表达丰度,分析表达水平与环境关系。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 样本采集 | 尼斯金采水器 | -- | -- |
| 样本过滤 | Sterivex滤器 | Millipore | -- |
| DNA提取 | AllPrep DNA/RNA试剂盒 | Qiagen | -- |
| 宏基因组测序 | NovaSeq 6000 S4测序平台 | Illumina | -- |
| 宏基因组组装 | MEGAHIT组装软件 | -- | -- |
| 宏基因组分箱 | MetaBAT2分箱工具 | -- | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本采集与处理 | 采集站位、深度、体积、过滤方式、存储条件 阅读提示:Methods 'Metagenomic analysis of microbial communities from the OC1703A transect' |
| DNA提取与测序 | 提取试剂盒、测序平台、读长、深度 阅读提示:Methods 'Metagenomic analysis of microbial communities from the OC1703A transect' |
| 宏基因组组装与分箱 | 组装参数、分箱参数、最小contig长度 阅读提示:Methods 'Metagenomic analysis of microbial communities from the OC1703A transect' |
| Rubisco基因鉴定 | HMM模型、e-value阈值、覆盖度阈值、系统发育方法 阅读提示:Methods 'Identification and curation of encoded rubisco proteins' |
| 丰度计算 | 比对参数、存在阈值、相对丰度计算方式 阅读提示:Methods 'Abundance and distribution of REOs across the OC1703A transect' |
| 基因表达分析 | 宏转录组来源、比对参数、表达阈值、过滤标准 阅读提示:Methods 'Genome-resolved transcriptomics of REOs' |