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Nat.Med. |苏黎世Ruedi Aebersold教授用PCT-SWATH/DIA将组织样品信息转换为永久蛋白质组图谱信息

人阅读 发布时间:2019-09-05 14:29


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前言

 

做科研的广大研究者们都知道,科研样本对于我们的研究起着决定性的作用。对于我们来说每个样本都是独特的、珍贵的、甚至有些样本是非常难获取的,或许有时候的损失可能会带来延期、重制样、甚至错失发文先机。本篇由苏黎世联邦理工学院Ruedi Aebersold教授团队Nature Medicine杂志(IF=30.641)发表题为“Rapid mass spectrometric conversion of tissue biopsy samples into permanent quantitative digital proteome maps”的研究论文,该研究提出了一个方法,可以快速稳定地将组织样本(约切片大小)转化为一份数据文档,永久地存贮这个样本经质谱分析得到的蛋白质组结果。

 

 

基本信息

英文标题:Rapid mass spectrometric conversion of tissue biopsy samples into permanent quantitative digital proteome maps

中文标题:将组织活检样品快速质谱转换为永久定量数字蛋白质组图谱

材料:组织活检样品           

影响因子:30.641

发表期刊:Nat.Med.                        

主要技术:PCT-SWATH/DIA


 

研究背景

    本质上,每个临床样本都是独特、珍贵,并且不可复制的。像组织切片那样的小样本,常常会被有限的几个分析项目所瓜分。我们这里提出了一个方法,可以快速稳定地将组织样本(约切片大小)转化为一份数据文档,永久地存贮这个样本经质谱分析得到的蛋白质组结果。这个方法结合了循环压力技术(PCT)质谱连续窗口分段式扫描技术(SWATH)我们可以在电脑中反复对产生的海量蛋白谱图进行分析,相互比较和数据挖掘来发现和量化特异的蛋白表达情况。在这篇文章中,我们用这个方法将来自9个肾癌病人的18个组织切片分别转化为SWATH-MS多肽离子碎片谱图,并从这些谱图中对2000个蛋白样本进行定性和定量分析。我们发现肾组织切片的蛋白质组测序结果具有很好的可重复性,而且能完全将肾癌病人和健康人,以及不同组织形态的肾癌亚型区分开来。

 

 

实验方法

1.   组织裂解和蛋白质提取(~1 hr)

 

 

2.  蛋白质消化
 


 

3..SCX分馏
 


 

4.SWATH/DIA-MS 数据采集(~3hr)

 

5.针对性数据分析


 

6.统计分析

不同技术重复之间的变异系数;

 

组间和组内的变异系数:

不同癌症分型间的聚类分析:


 

小鹿推荐

PCT技术是一种基于循环超高压的快速破碎微量样品的技术。具有速度快、损失少、操作简便、保真度高等特点,结合SWATH(DIA模式)的全范围扫描技术特别适合大队列(几十上百甚至上千个样品)、少量样品(比如组织活检样品)蛋白组批量分析。文章采用PCT-SWATH技术进行肾癌样品的批量分析,不仅能区分健康组织和肿瘤组织,还能实现对癌症的分子分型。进一步的,该方法还可以应用于药物功能分析、突变功能分析等多个研究领域,是从蛋白组层面进行大队列分析的理想方法

 

 

参考文献

Guo T. et al., Rapid mass spectrometric conversion of tissue biopsy samples into permanent quantitative digital proteome maps. 2015, Nat Med.

作者简介


 

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往期回顾

01

10年老司机告诉你如何以文章为导向对代谢组实验数据进行分析与作图

02

项目文章| Circulation,IF=23.054复旦大学重点实验室发表颗粒物暴露与应激激素水平试验研究

03

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END


 

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