实验秘诀 | 百奥益康细胞冻存液使用注意事项

在单细胞实验中，对于细胞样本，如果采样后无法立即进行实验，那细胞状态可能无法保持，这将对数据结果产生一定影响。利用百奥益康自主研发的通用细胞冻存试剂盒，能较好的保持新鲜细胞样本的活性，维持其初始状态，从而解决细胞样本保存与运输问题。

使用百奥益康细胞冻存液时，需从冻存液准备、细胞处理、冻存操作、储存管理及后续复苏等全流程严格把控，以保障细胞活性与冻存效果，具体注意事项如下：

 

 

 

一、冻存液准备阶段注意事项

 

1. 融化与混匀要求

    冻存液需提前从低温环境（- 20℃）取出，室温自然融化，严禁直接加热（如水浴煮沸、微波炉加热），避免高温破坏冻存液中的保护成分（如 DMSO、血清替代物等）。

    完全融化后，需用移液枪轻轻吹打或颠倒离心管充分混匀，确保成分均一，防止局部浓度不均影响细胞保护效果。

 

2. 避免反复冻融

    冻存液融化后应一次性使用完毕，不可再次冷冻保存。反复冻融会导致保护剂失效、成分降解，增加细胞冻存死亡率。若单次用量较少，可在融化后立即按单次用量分装（需无菌操作），并快速放回原低温环境。

 

 

二、细胞处理阶段注意事项

 

1. 细胞状态把控

    仅选择对数生长期、活性≥90% 的细胞进行冻存，避免冻存衰老、凋亡或污染（细菌、真菌、支原体等）的细胞 —— 污染细胞会影响冻存效果，且复苏后可能污染其他细胞，衰老 / 凋亡细胞则复苏率极低。

    若为贴壁细胞，消化时需控制胰酶浓度与作用时间，避免过度消化导致细胞损伤；悬浮细胞离心前需确保细胞悬液均匀，避免细胞聚团。

 

2. 离心与重悬操作

    离心条件需根据细胞类型调整（如普通贴壁细胞常用 1000-1500×g 离心 3-5min，PBMC 细胞为 300×g 离心 5min），不可一概而论—— 离心力过大或时间过长会挤压细胞导致损伤，离心力过小则无法有效收集细胞。

    弃去上清后，加入冻存液重悬细胞时，需用移液枪轻柔吹打（避免剧烈搅拌或反复吹打），确保细胞均匀分散成单细胞悬液，防止细胞聚团（聚团细胞内部易因缺氧、保护剂渗透不足而死亡）。

 

3. 冻存密度规范

    严格按照推荐密度冻存：通用型冻存液推荐密度为 1X106/mL，无血清干细胞 / 原代细胞冻存液推荐 1−2×106/mL。密度过高易导致细胞间挤压损伤，密度过低则复苏后细胞数量不足，需额外延长培养时间。

 

 

三、冻存操作与储存阶段注意事项

 

1. 冻存管选择与标记

    必须使用耐低温、无菌的专用细胞冻存管（可耐受 - 196℃液氮），避免使用普通离心管（低温下易破裂，导致细胞污染或流失）。

    分装后需立即标记，内容包括细胞名称、冻存日期、细胞代次、操作者等，避免后续混淆（尤其是多种细胞同时冻存时）。

 

2. 降温速率控制

    遵循 “缓慢降温” 原则：通用型冻存液需借助程序性冻存盒等工具，确保降温速率约为 1℃/min（若直接将冻存管放入 - 80℃冰箱，降温速率过快会导致细胞内形成冰晶，刺破细胞膜）。

    冻存管在 - 80℃冰箱中放置不可超过 72 小时，需在 24-48 小时内转移至液氮（-196℃）中长期储存 ——-80℃为 “过渡储存温度”，长期存放会因温度波动导致细胞活性逐渐下降。

 

3. 液氮储存安全

    转移至液氮罐时，需先确认液氮罐内液氮量充足（液面需覆盖所有冻存管），避免冻存管暴露在空气中导致温度回升。

    操作液氮时需佩戴防冻手套、护目镜，避免液氮直接接触皮肤；冻存管从液氮中取出时需缓慢升温（避免温差过大导致管体破裂）。

 

 

四、其他关键注意事项

 

1. 无菌操作贯穿全程

    所有操作（如冻存液分装、细胞离心重悬、冻存管开盖 / 封盖）需在超净工作台内无菌环境下进行，操作前需对台面、移液枪、冻存管等进行消毒（如 75% 酒精擦拭），避免细菌、支原体等污染。

 

2. 不同类型冻存液不可混用

    通用型冻存液、无血清干细胞 / 原代细胞冻存液的配方（如保护剂种类、血清含量）不同，需根据细胞类型选择对应冻存液，不可交叉使用（如用通用型冻存液冻存敏感原代细胞，可能因保护不足导致复苏失败）。

 

3. 复苏配合注意事项

    冻存细胞复苏时，需快速将冻存管放入 37℃水浴中融化（1-2min 内完全融化），避免融化过程过长导致细胞损伤；融化后需立即用培养基稀释（降低冻存液中 DMSO 浓度，避免其对细胞的毒性），这一步需与冻存操作配合，确保细胞从冻存到复苏的 “低温保护 - 快速复温” 衔接顺畅。

 

遵循以上注意事项可尽可能的降低细胞冻存过程中的损伤，提高复苏后细胞的活性与存活率，确保后续实验或培养的顺利进行。 

 

 

 

百奥益康试剂盒

 

 

百奥益康样本保存系列试剂盒：

BA3301，动物组织通用保存液，100 mL，¥1,200

BA3313，胰腺组织保存液，4 rxns，¥2,000

BA3350，动物胃肠道组织保存液，100 mL，¥1,500

BA3312，动物组织冻存液，100 mL，¥2,500

BA3309，通用细胞冻存液，100 mL，¥800

BA3341，无血清无DMSO细胞冻存液，100 mL，¥1,200

 

百奥益康细胞核悬液制备系列试剂盒：

BA3302，动物组织细胞核悬液制备试剂盒，10 rxns，¥3,000

BA3315，肌肉组织细胞核悬液制备试剂盒，10 rxns，¥3,500

BA3342，脂肪组织细胞核悬液制备试剂盒，10 rxns，¥3,500

BA3343，血管组织细胞核悬液制备试剂盒，10 rxns，¥3,500

BA3319，植物组织通用细胞核悬液制备试剂盒，10 rxns，¥4,000

 

百奥益康细胞悬液制备系列试剂盒：

BA3303，哺乳动物组织通用解离试剂盒，10 rxns，¥2,500

BA3348，哺乳动物组织通用解离试剂盒（Plus版)，10 rxns，¥3,000

BA3344，通用外周血单个核细胞(PBMC)分离液（沉降法），100 mL，¥300

BA3331，小鼠外周血单个核细胞(PBMC)分离液，100 mL，¥500

BA3332，人外周血单个核细胞(PBMC)分离液，100 mL，¥500

BA3333，人骨髓血单个核细胞(BMMC)分离液，100 mL，¥500

BA3305，小鼠脑组织解离试剂盒，10 rxns，¥3,000

BA3326，人脑组织解离试剂盒，10 rxns，¥3,000

BA3307，皮肤组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,000

BA3340，小鼠皮肤组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,000

BA3308，骨组织解离试剂盒，10 rxns，¥4,000

BA3310，血管组织解离试剂盒，10 rxns，¥9,000

BA3337，血管组织解离试剂盒（Plus），10 rxns，¥12,000

BA3314，胰腺组织解离试剂盒，4 rxns，¥6,000

BA3320，肿瘤组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,000

BA3349，肿瘤组织解离试剂盒（Plus版），10 rxns，¥3,000

BA3321，耳蜗组织解离试剂盒，10 rxns，¥4,000

BA3322，肾脏组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,500

BA3323，肝脏组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,500

BA3324，脾脏组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,000

BA3325，肺脏组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,000

BA3327，心脏组织解离试剂盒，10 rxns，¥5,000

BA3328，气管组织解离试剂盒，10 rxns，¥4,000

BA3316，胃肠道组织解离试剂盒，10 rxns，¥5,000

BA3334，脊髓组织解离试剂盒，10 rxns，¥4,000

BA3336，输卵管组织解离试剂盒，10 rxns，¥5,000

BA3335，环节动物组织解离试剂盒，10 rxns，¥6,000

BA3347，蛾肠道组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,500

BA3351，卵巢组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,500

BA3352，小型哺乳动物卵巢组织解离试剂盒，10 rxns，¥2,500

BA3317，植物组织通用原生质体悬液制备试剂盒，10 rxns，¥6,000

 

百奥益康细胞悬液优化系列试剂盒：

BA3311，红细胞裂解液，100 mL，¥150

BA3345，抗细胞结团剂，100 mL，¥1,500

BA3338，死细胞去除缓冲液，10 rxns，¥2,000

BA3339，死细胞碎片杂质去除试剂盒，10 rxns，¥4,000

BA3329，消化系统组织细胞碎片去除试剂盒，10 rxns，¥4,000

BA3330，脑组织细胞碎片去除试剂盒，10 rxns，¥2,000