ELISA试剂盒以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。
顺辰生物技术老师将操作中各个环节常出现的错误操作正确操作指导总结如下:
一、加样
错误的操作:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时);
3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
正确操作建议:
1) ELISA试剂盒标本为血清:最好将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
二、 孵育
错误操作:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。
正确操作建议:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
三、洗板
错误操作:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全,洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。
正确操作建议:
1)ELISA试剂盒保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后最好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
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