大鼠卵母细胞的采集及发育分型

大鼠超排可以用于研究环境污染物或药物对生殖系统的毒性影响；通过诱导超排并观察卵母细胞和胚胎的发育情况，可以评估潜在的生殖毒性。大鼠卵母细胞的发育过程可以分为3个阶段：GV期、MI期、MⅡ期。

方法

1.雌性SD大鼠，腹腔注射PMSG 60IU，注射PMSG 46-48h后，腹腔注射hCG 20IU，诱导超排。

2.准备卵母细胞培养滴：在60mm培养皿内做若干水滴状的滴，并用矿物油覆盖，放入培养箱（37 ℃、5%CO2）平衡4h以上（推荐过夜平衡）。

3.卵母细胞采集的时间通常在SD大鼠注射hCG后13-16h内进行。

4.雌性SD大鼠背部、腹侧备皮，酒精消毒背侧、腹侧皮肤。在距离大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪开皮肤、肌肉，可见白色的脂肪组织，拉出脂肪组织，可见到粉红色的卵巢，摘除卵巢及输卵管，将其放入500μL的KSOM胚胎培养液液体中。

5.在体式显微镜下观察到输卵管的上部（壶腹部）有一个明显的膨大处。用镊子固定输卵管，用一根1 ml注射器纵向撕开壶腹部，用此法将其整个撕裂，卵团会游离到KSOM胚胎培养液液体中。

6.在KSOM胚胎培养液中再加入同体积的透明质酸酶溶液（0.6mg/mL），用移液枪轻轻吹打几下，放入CO2培养箱中，1分钟后取出。

7.在显微镜下用移卵管收集卵母细胞到卵母细胞培养滴中，并用剩下的液滴逐步清洗，清洗结束后放回37℃ CO2培养箱中。

8. GV期、MI期、MⅡ期的卵母细胞。

GV期：这是卵母细胞生长和发育的早期阶段，卵母细胞处于减数分裂的第一次分裂前期。

MI期：卵母细胞进入减数分裂的第一次中期。

MⅡ期：这是卵母细胞成熟的最终阶段，卵母细胞准备好受精

注意事项：

大鼠的输卵管不直接与卵巢相连，而是紧贴卵巢表面，呈弯弯曲曲的形状。大鼠输卵管可分为漏斗部、壶腹部、峡部和子宫部。