小鼠腹腔巨噬细胞的分离方法

1. C57BL/6小鼠脱颈处死。

2. 腹部剃毛，75%酒精消毒。

3. 用注射器吸取10mL冷的生理盐水，提起小鼠腹中部的皮肤和腹膜，让针头从提取处穿刺进入小鼠腹腔，缓缓推注生理盐水。

4. 轻揉小鼠腹部数次，静置3min，使液体在腹腔内充分流动。

5. 用镊子提起下腹皮肤，使与腹膜分开，在镊子提取处将皮肤剪开一个小口，再撕开整个腹部皮肤，使腹膜暴露。

6. 将注射器针头插入缝隙处抽取腹腔液。

7. 将腹腔液在250g下离心5分钟。

8. 将细胞重悬在含有10%FBS的RPMI 1640培养基中，并在37°C、5%CO2的培养箱中孵育2小时。

9. 然后去除非贴壁细胞，用PBS洗涤，分离后立即将腹腔巨噬细胞用于后续实验。