干货分享 | 细胞房的基本要求

1. 细胞房着装要求

操作细胞培养物前后应酒精喷洒消毒手部，穿戴个人防护装备不仅可保护您免受危险品污染，还可降低皮屑以及衣服上污物和灰尘污染培养物的可能。

正确的穿衣顺序：

（1）一更：换鞋，手消，戴口罩，戴帽子

（2）二更：穿无菌衣、无菌手套、手消、酒精喷洒消毒鞋底；

 

2. 超净台试剂布局

超净工作台或生物安全柜里的物品摆放一般遵循以下右手使用习惯，并可根据特殊实验中增加物品进行相应的改动。

① 在工作台中部开阔区域放置细胞培养容器；② 移液器置于右前方易于取用的地方；③ 试剂和培养基置于右后方，便于吸取；④ 离心管架置于中后部，用于固定其他试剂；⑤ 小型容器置于左后部，用于盛放废液。

 

3. 人为操作技巧

小心取用无菌实验物品，勿碰触吸管尖头部或容器瓶口，也不要在打开的容器正上方操作实验。

每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同也不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品全部带出工作台，以 75% 酒精擦拭无菌操作台面并进行至少 15 min 紫外灯照射消毒。操作间隔应让无菌操作台运转 10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。

离心管、冻存管等容器需用抗酒精的标记笔标示内容物名称、操作日期、操作人员姓名。若是细胞传代培养，需注明目前的细胞代数，细胞名称、细胞数量等信息。

 

4. 细胞房布局

(1) 细胞房功能分区

理想的无菌操作室应划分为三部分：

a) 一更间---放在外，主要提供更换衣帽，鞋子，口罩，手套等。

b）二更间---位于更衣间与操作间之间，也可同时和几个操作间相通。目的是保证操作间的无菌环境。

c）细胞操作间---放在内间，分为无菌操作室、培养室。

房间设置要求：各个房间高度适宜（不超过 2.5m），顶部过高会影响紫外线的灭菌效果；大小适当，房间过大，清扫和消毒不便；过小，操作不便；墙壁应光滑无死角，以便清洗和消毒。

(2) 细胞房设计原则及条件

设计原则：防止微生物污染和有害因素影响。

条件要求：封闭、正压：隔离门和空调系统、洁净通风系统；人流、物流独立不交叉。

温湿度：培养箱内是 37℃，饱和湿度；室内是温度 18℃-26℃，湿度是 45%-65%。

洁净度：空气洁净度等级是洁净空间单位体积空气中，以大于或等于被考虑粒径的离子最大浓度限值进行划分的等级标准。洁净度等级应在空态、静态和动态放大进行测试，使用尘埃粒子测试仪来测定。保证在 C 级背景下的 A 级环境下操作。

(3) 细胞房维护保养：

（a）每天检查并记录细胞房温度、压差、噪音、相对湿度（细胞房温湿度记录表)，发现异常要及时报告并处理。

（b）生物安全柜或超净台维护：每年委托有资质第三方对生物安全柜或超净台进行风速、气流流型、高效测漏、尘埃粒子、沉降菌的检测。

日常维护：定期对生物安全柜或超净台进行尘埃粒子、沉降菌或浮游菌的测试，发现不合格及时更换滤网或进行维修。

（c）空调系统维护: 定时更换初中效过滤器，每年请有资质第三方对洁净室进行尘埃粒子、沉降菌或浮游菌、换气次数、高效测漏、压差等检测。

日常维护：按照要求定期监测尘埃粒子、沉降菌或浮游菌

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