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技术资料/正文
ELISA实验过程中常见问题以及解答
437 人阅读发布时间：2023-07-25 09:34
ELISA实验是一种广泛应用于生物学、医学、食品安全等领域的检测方法，但在实验过程中往往会出现一些问题，挑战实验者的耐心和技术。本文将为大家介绍常见的ELISA实验问题及解决方法，帮助大家轻松解决困扰
1、ELISA试验出现非常弱的结果，常见有7种原因，其解决方法如下：
1)可能原因：温育的时间或者温度不够;
解决方法：校正温育箱温度。
2)可能原因：显色反应时间太短;
解决方法：校正定时钟准确定时。
3)可能原因：所用配制缓冲液的蒸馏水有问题;
解决方法：使用新鲜合格的蒸馏水。
4)可能原因：加入抗体/酶的稀释液浓度太低;
解决方法：按照说明书保存试剂盒和准确配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密。
5)可能原因：酶标仪滤光片不正确;
解决方法：检查酶标仪使用的滤光片。
6)可能原因：试剂盒没有充分平衡;
解决方法：试剂室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温。
7)可能原因：不正确的试剂储存方式;
解决方法：按照说明书要求保存试剂盒。
2、 试验结果白板，而且阳性对照不显色，应如何分析和查找原因?
答：试验结果白板，而且阳性对照不显色，常见原因如下：
a)可能原因：漏加或者误加试剂;
解决方法：检查试验记录和剩余试剂。每次加液前均应核对标签。
b)可能原因：试剂过期;
解决方法：使用有效期内的产品。
c)可能原因：洗板液配制中出现问题，如量筒不干净含HRP酶抑制物(叠氮钠
等);
解决方法：使用干净的器皿，正确配制试剂。
d)可能原因：温育的时间或温度不够;
解决方法：校正温育箱温度。
e)可能原因：标准品失活或者丢失;
解决方法：标准品正确保存、溶解和混匀。
f)可能原因：抗体失活或者丢失;
解决方法：更换抗体或者提高抗体浓度
g)可能原因：酶失活或者丢失
检查方法：把工作浓度的酶再稀释20-100倍，取5uL加入50ul的显色底物，终止后显色是否能达到1.0左右，此为酶的粗略估计。
解决方法：更换酶或者提高酶的浓度。
h)可能原因：显色底物失活
检查方法：加少量的工作浓度的酶，TMB是否很快显色。
解决办法：更换显色底物.
3. 试验结果空白背景高，这是什么原因造成的?
答：试验结果空白背景高，常见原因如下：
a)可能原因：洗板不干净;
解决方法：充分洗涤，彻底拍干;洗板要防止交叉污染;浓缩洗液准确配制;吸嘴尽可能一次性使用;加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。
b)可能原因：显色液变质或者试剂过期;
解决方法：检查试剂盒有效期。
c)可能原因：试剂稀释有误，如加酶的浓度过高;
解决方法：请按说明书所示稀释倍数配制;
d)可能原因：蒸馏水受酶等污染;
解决方法：使用新鲜蒸馏水;
e)可能原因：试剂混用;
解决方法：不同批号试剂勿混用。
f)可能原因：培养箱温度超过37℃或反应时间过长。
解决方法：显色反应时间适当缩短。
ELISA实验是一种高灵敏、高特异性的检测方法，但在实验过程中常常会出现一些问题。本文介绍了常见的ELISA实验问题及解决方法，希望能够帮助大家更好地开展实验工作，保证实验结果的准确性和可靠。
1、ELISA试验出现非常弱的结果，常见有7种原因，其解决方法如下：
1)可能原因：温育的时间或者温度不够;
解决方法：校正温育箱温度。
2)可能原因：显色反应时间太短;
解决方法：校正定时钟准确定时。
3)可能原因：所用配制缓冲液的蒸馏水有问题;
解决方法：使用新鲜合格的蒸馏水。
4)可能原因：加入抗体/酶的稀释液浓度太低;
解决方法：按照说明书保存试剂盒和准确配制工作液。校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密。
5)可能原因：酶标仪滤光片不正确;
解决方法：检查酶标仪使用的滤光片。
6)可能原因：试剂盒没有充分平衡;
解决方法：试剂室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温。
7)可能原因：不正确的试剂储存方式;
解决方法：按照说明书要求保存试剂盒。
2、 试验结果白板，而且阳性对照不显色，应如何分析和查找原因?
答：试验结果白板，而且阳性对照不显色，常见原因如下：
a)可能原因：漏加或者误加试剂;
解决方法：检查试验记录和剩余试剂。每次加液前均应核对标签。
b)可能原因：试剂过期;
解决方法：使用有效期内的产品。
c)可能原因：洗板液配制中出现问题，如量筒不干净含HRP酶抑制物(叠氮钠
等);
解决方法：使用干净的器皿，正确配制试剂。
d)可能原因：温育的时间或温度不够;
解决方法：校正温育箱温度。
e)可能原因：标准品失活或者丢失;
解决方法：标准品正确保存、溶解和混匀。
f)可能原因：抗体失活或者丢失;
解决方法：更换抗体或者提高抗体浓度
g)可能原因：酶失活或者丢失
检查方法：把工作浓度的酶再稀释20-100倍，取5uL加入50ul的显色底物，终止后显色是否能达到1.0左右，此为酶的粗略估计。
解决方法：更换酶或者提高酶的浓度。
h)可能原因：显色底物失活
检查方法：加少量的工作浓度的酶，TMB是否很快显色。
解决办法：更换显色底物.
3. 试验结果空白背景高，这是什么原因造成的?
答：试验结果空白背景高，常见原因如下：
a)可能原因：洗板不干净;
解决方法：充分洗涤，彻底拍干;洗板要防止交叉污染;浓缩洗液准确配制;吸嘴尽可能一次性使用;加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用，不要反复使用，否则易造成污染。
b)可能原因：显色液变质或者试剂过期;
解决方法：检查试剂盒有效期。
c)可能原因：试剂稀释有误，如加酶的浓度过高;
解决方法：请按说明书所示稀释倍数配制;
d)可能原因：蒸馏水受酶等污染;
解决方法：使用新鲜蒸馏水;
e)可能原因：试剂混用;
解决方法：不同批号试剂勿混用。
f)可能原因：培养箱温度超过37℃或反应时间过长。
解决方法：显色反应时间适当缩短。
ELISA实验是一种高灵敏、高特异性的检测方法，但在实验过程中常常会出现一些问题。本文介绍了常见的ELISA实验问题及解决方法，希望能够帮助大家更好地开展实验工作，保证实验结果的准确性和可靠。