LONZA 4D-Nucleofector LV 大规模流式细胞核转染系统 ——人T细胞大规模高效转染

LONZA 4D-Nucleofector LV 大规模流式细胞核转染系统
——人T细胞大规模高效转染

动物细胞转染技术多样，包括化学法、病毒转导、传统电穿孔法等。

化学转染磷酸钙沉淀法、DEAE-葡聚糖、脂质体转染等，操作简单快捷，但大部分原代细胞、干细胞、细胞系转染效率低下，仅有少数贴壁细胞系转染较高效，批次间重复性差。

使用慢病毒、腺病毒、逆转录病毒的病毒转导技术，虽然转染效率高，但转染底物有局限，转染的基因片段大小需<10kb。且经济成本相当高昂，需要提前包装病毒，实验流程繁复，耗时1-2周。

传统电穿孔技术，操作简单快速，转染基因限制少，但细胞毒性大、原代细胞成功率很低。



LONZA 4D-Nucleofector细胞核转染系统，是在传统电穿孔技术的基础上，针对每一种细胞，优化电脉冲参数、转染液，使细胞转染效率、细胞活率得到显著提升，解决了原代细胞、干细胞、T细胞等使用电穿孔转染效率低下的问题。同时，4D-Nucleofector可让外源基因直接穿过核膜进入细胞核，不依赖细胞有丝，实现2小时快速表达。



LONZA全球共享数据库，包含超过1500种原代细胞、细胞系的转染数据，提供包括细胞来源、传代、培养条件、培养基、到转染后培养技巧的成熟流程，让研究者在海量数据支持中快速开展实验，并取得成功。操作4D-Nucleofector核转染系统时，只需一键调用LONZA内置的转染程序，即可实现细胞快速、高效转染，而无需自行摸索转染条件。

LONZA 4D-Nucleofector LV大规模流式细胞核转染系统，可提供单次最高2×10^9个细胞、封闭、无菌的高效转染，在人T细胞、CHO悬浮细胞、HEK23悬浮细胞、K562细胞等超过700种细胞中大量应用。

1、封闭、无菌的系统和耗材设计，满足细胞治疗基础研究需求。


2、规模可简单放大，在4D-Nucleofector X模块上进行的2×10^4细胞数量的优化转染方案，可直接在LV上使用。


3、符合cGMP要求，可使用符合美国FDA21 CFR part 11、欧盟Annex 11的软件进行控制，适用于严格监管的GMP实验室。

①用户管理（登陆，不同级别）
②具有用户姓名与时间标记的电子签名
③任何记录的修改或是数据的创建均被记录在案
④结果报告：失败报告，以及详细的问题描述
⑤可根据21CFR part11的要求导出数据（加密，预防）
⑥审计追踪（使用记录、更改记录）
⑦无数据删除可能

4、操作灵活，提供单次1mL（最多1×10^8个细胞）的手动加样、20×1mL（最多2×10^9个细胞）的自动加样，快速高效。


分别用4D-Nucleofector细胞核转仪X模块（100μL）、LV模块（1mL）向包括人T细胞、PBMC、293细胞、CHO细胞在内多种代表性细胞中转染pmaxGFP载体，实现转染规模的线性放大。



LONZA 4D-Nucleofector LV大规模流式细胞核转染系统，基因治疗基础研究的不二工具。

1、作为非病毒转染技术，适用于不同的基因编辑系统，如锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶（TALEN）、CRISPR/Cas系统。

2、可转染多种不同的底物，如DNA、mRNA、蛋白（如Cas9 RNP），由于转染条件相同，可进行不同底物的简单共转染。

3、常用于应用iPS、CD34+造血干细胞、T细胞的稳定修饰。

4、技术成熟可靠，有≥80本相关出版物刊载，众多领域的知名学者正在使用4D-Nucleofector技术，全球发表文章超过10,000篇，并持续不断增加中！

LONZA 4D-Nucleofector大规模流式核转染系统，作为转染人原代T细胞的强大方法，与CRISPR和其他基因编辑技术的联合应用，已成为基因治疗基础研究的理想工具。

 

参考文献
1.Closed-system transposon-mediated manufacture of GMP grade CAR T-cells via the Lonza Nucleofector LV XL.  LM Brownrigg,et al. ELSERIER(2020)

2.Biomimetic mineralized collagen scaffolds and their effect on osteogenic differentiation. L Luo,et al. ELSERIER(2020)

3.Optimization of clarification process for viral vectors. B Raghavan,et al. ELSERIER(2020)

4.Generation and testing of clinical-grade exosomes for pancreatic cancer. Mayela Mendt,et al. JCI Insight(2018)

5.Off the shelf T cell therapies for hematologic malignancies. BJ McCreedy,et al. ELSERIER(2018)

6.Unlocking the Potential of CRISPR-Based Gene Editing. Andrea Toell. Genetic Engineering & Biotechnology News(2017)