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技术资料/正文
犬糖类抗原125（CA125）ELISA检测试剂盒 使用说明书
527 人阅读发布时间：2024-05-30 11:41
本试剂盒只能用于科学研究 犬（Canine）糖类抗原125（CA125）ELISA检测试剂盒 使用说明书
检测原理：试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被糖类抗原125（CA125）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并che底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的糖类抗原125（CA125）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。自备物品：1. 酶标仪（450nm） 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱
操作注意事项：1. 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、4、8、16、32、64 U/ml
试剂的准备：20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法：1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。 2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤：1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL； 3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断：绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。