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细胞培养基里如何正确吹打细胞
人阅读 发布时间:2024-10-31 13:25
众所周知,细胞培养是个技术活,培养过程中细胞培养状态与实际培养操作和培养条件息息相关。可以这样说,同样的细胞,给不同的人培养,即便使用相同的培养条件,培养出来的效果也是会有一些差异的。
下面我们就说下细胞培养里非常常见的一个操作,吹打细胞。说起来只有简简单单四个字,但如果吹打掌握不好的话,细胞很容易受到机械损伤和剪切力影响,导致细胞受损状态变差或者直接死亡。
机械损伤很好理解,这个主要是指枪头刮擦、细胞间相互碰撞等导致的细胞损伤。为了减少这部分损伤,首先是尽量减小吹打力度,只要保证能够吹下吹散细胞就行,大部分悬浮细胞不需要很大力度吹打即会散开,贴壁细胞一定要消化到细胞可以轻轻吹下再终止消化,千万不要消化不完全然后很用力吹打细胞,这样暴力吹下的细胞往往状态都不会太好。其次枪头刮擦这个字面意思已经很明显了,就是枪头与细胞层接触甚至研磨导致细胞直接死亡,一般新手遇到这种问题比较多,刚开始做实验的靠主动意识控制枪头与培养瓶底间距,避免枪头直接接触瓶底,时间久了成习惯就好了。枪头直接接触瓶底还可能划伤瓶底,产生划痕,划痕的这部分是很难再有细胞生长的,因此也不要用有大量划痕的培养瓶培养细胞。
剪切力这个词对大多数人来说是比较陌生的。剪切简单来说就是物体横截面收到外力影响,沿外力方向相对移动的现象,这个外力就叫做剪切力,生活中常见的就是用剪刀剪纸,两片剪刀片相对运动对纸片横截面产生剪切力从而剪断纸张。细胞培养中明显没有剪刀,那剪切力损伤是怎么形成的呢,让我们接着往下看。细胞完全培养基里都是有血清的,而血清中含有大量蛋白质,因此很容易出现气泡,我们都知道气泡会破碎,一触就破。那么问题就来了,如果培养基里有很多气泡,细胞在气泡与培养基之间,当气泡破碎时,细胞瞬间会受到强大的剪切力影响,很容易直接就破碎了。
那怎么减少气泡的产生呢,其实很简单。一个是减小吹打力度,力度合适的话就更容易控制培养基流速,避免涡流产生气泡。另一个就是吹打的时候枪头的的培养基不要打完,不然就很容易打入空气,比如说1ml枪头吸了1ml培养基,最后只打出800-900ul,留一点培养基不打出就可以避免混入空气产生气泡。当然说起来很简单,不过这个还是很看技术的,需要对移液器控制得当才能更好的避免气泡。
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