探秘TMD8细胞：攻克癌症堡垒的关键战士

一、细胞背景：为何聚焦TMD8？

       TMD8细胞源自活化B细胞样弥漫性大B淋巴瘤（ABC-DLBCL），具有高表达BCR信号通路和NF-κB持续活化特性，对BTK抑制剂（如伊布替尼）敏感但易耐药，是研究耐药机制、靶向药物开发的金标准模型。

二、复苏培养：唤醒冷冻的“战士”

1. 快速解冻，减少损伤

1. 防护：戴面罩/手套，从液氮罐取出冻存管；  
2. 解冻：37℃水浴 **<60秒**，轻摇至冰晶消失；  
3. 稀释：将细胞悬液注入含5ml预温培养基（如RPMI-1640+20%FBS）的15ml离心管；  
4. 离心：300g × 5分钟，弃上清；  
5. 重悬：用新鲜培养基轻柔重悬，移入T25培养瓶；  
6. 培养：37℃、5% CO2培养箱静置，24小时后首次换液。

关键点：全程快速操作，避免DMSO毒性；首次换液去除死亡细胞碎片。

三、消化与保存：高效传代与长期储备

1. 传代消化（悬浮细胞特性）

- 无需胰酶：直接吹打收集细胞（若轻微贴壁，可用0.25%胰酶孵育2-3分钟）；  
- 离心：300g × 5分钟，弃上清；  
- 分瓶：按1:3~1:4比例用新鲜培养基重悬分装。

2. 冻存流程

1. 离心收集对数期细胞（>90%活率）；  
2. 用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬至5×10⁶~1×10⁷ cells/ml；  
3. 分装至冻存管；  
4. **程序降温**：4℃ 30min → -20℃ 2h → -80℃过夜 → 液氮长期保存。

冻存要点：DMSO终浓度≤10%，程序降温避免冰晶损伤。

四、培养注意事项：稳定生长的关键

五、难点解析：常见问题与对策

1. 细胞聚集严重

   • 对策：轻柔吹散；添加低浓度肝素（0.1-1 U/ml）或DNase I（10μg/ml）。

2. 生长缓慢/凋亡增多

   • 检查FBS活性、支原体污染；确保细胞密度>1×10⁵/ml。

3. 伊布替尼敏感性下降

   • 定期检测基因突变（如C481S BTK突变）；早期冻存低代次细胞。

六、应用前景：从机制探索到精准医疗

1. 耐药机制研究：揭示BTK抑制剂耐药新靶点（如PLCG2突变、NF-κB替代通路）；

2. 联合用药开发：验证“BTKi+BCL2抑制剂”、“BTKi+免疫调节剂”协同效应；

3. CAR-T疗效预测：评估肿瘤微环境对细胞疗法的响应；

4. 个体化治疗模型：构建患者来源PDX模型，指导临床用药。

结语

TMD8细胞作为ABC-DLBCL研究的核心工具，其规范操作与难点攻克是实验成功的基石。随着新型靶向药物与细胞疗法的崛起，这一细胞模型将持续推动淋巴瘤精准治疗的发展，为攻克癌症提供关键突破口。