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智立中特（武汉）生物科技有限公司
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技术资料/正文
解密人胰腺癌细胞“明星”Capan-2：从实验室至宝到操作全攻略
102 人阅读发布时间：2025-06-19 09:42
Capan-2人胰腺癌细胞作为源自人胰腺导管腺癌的经典细胞系，Capan-2因其保留腺癌特征（如腺样结构、粘蛋白分泌）和关键基因突变（KRAS、TP53）而成为研究肿瘤发生、转移及药物响应的理想模型。下面为您详解其全流程操作要点：
一、核心操作指南（步步为营）
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复苏流程（冰火淬炼）
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快速解冻：37℃水浴中轻柔摇晃冻存管，90秒内完成解冻（避免渗透损伤）。
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梯度稀释：将细胞悬液滴加至含5ml预温培养基的离心管，1000rpm离心5分钟，彻底弃上清（去除DMSO）。
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温和重悬：用新鲜培养基（含10% FBS）轻柔重悬，接种于培养瓶（推荐密度：5×10⁴ cells/cm²）。
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关键提示：复苏后24小时避免移动培养瓶，减少物理扰动。
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消化传代（精准掌控）
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预处理：弃旧培养基，用PBS轻柔漂洗1次（去除血清抑制物）。
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酶解操作：加入0.25%胰酶-EDTA（覆盖瓶底即可），37℃孵育2-3分钟（镜下见细胞间隙增大立即终止）。
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中和终止：加入2倍胰酶体积的含血清培养基，吹打形成单细胞悬液（避免气泡）。
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离心重置：1000rpm离心5分钟，重悬后按1:3~1:5比例传代（维持高密度生长）。
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每日观察（明察秋毫）
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健康形态：贴壁后呈多角形/鹅卵石样，核质比高，可形成局部岛状聚集（腺癌特征）。
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污染警示：培养基突然变黄（细菌污染）、出现絮状物（真菌）或细胞颗粒化增多（死亡征兆）。
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密度管理：达80%融合时需传代，过度生长易诱发分化或死亡。
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二、长期保藏方案（双保险策略）
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常规培养保藏
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条件：37℃、5% CO₂、饱和湿度，使用RPMI-1640 + 10% FBS培养基。
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周期：每3~4天换液，每周传代1次（维持指数生长期）。
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液氮冻存（未来储备）
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冻存液配方：培养基 : FBS : DMSO = 7:2:1（终浓度10% DMSO）。
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程序降温：4℃ 30分钟 → -20℃ 2小时 → -80℃过夜 → 转移至液氮气相（-150℃）。
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细胞量控制：1~2×10⁶ cells/ml，每支冻存管1~1.5ml。
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复苏测试：冻存后1周复苏1支验证存活率（>80%为合格）。
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三、关键注意事项（成败细节）
| 风险环节 | 应对措施 | 后果警示 |
|---|---|---|
| 消化过度 | 严格计时+预冷PBS终止 | 细胞碎片化、贴壁能力丧失 |
| 血清浓度 | 禁止低于10%（推荐优质南美源FBS） | 生长停滞、形态分化 |
| 传代密度 | 接种密度≥3×10⁴ cells/cm² | 增殖延迟、集体凋亡 |
| 支原体污染 | 每月PCR检测+抗生素轮换 | 隐性改变基因表达谱 |
四、前沿应用场景药物研发平台
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吉西他滨耐药机制研究（天然耐药模型）
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靶向KRAS通路抑制剂的高通量筛选（如KRAS G12D抑制剂）
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肿瘤恶性行为解析
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侵袭转移研究（Transwell模型模拟血管穿透）
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肿瘤微环境互作（与癌相关成纤维细胞共培养）
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临床转化桥梁
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生物标志物挖掘（如粘蛋白MUC1表达监测）
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个体化药敏测试（PDX模型种子源）
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智立中特（武汉）生物科技有限公司，致力于为肿瘤研究提供稳定、高活性的细胞模型及定制化培养解决方案。让Capan-2成为您探索胰腺癌奥秘的可靠伙伴！