如何让Kelly细胞成为您神经肿瘤研究的黄金搭档？

Kelly人神经母细胞瘤细胞：全方位操作指南与应用解析

一、细胞简介与价值
        Kelly细胞源自一名15岁神经母细胞瘤女性患者骨髓，属MYCN基因扩增亚型（人源，ATCC CRL-3065 Au）。作为神经母细胞瘤研究的黄金模型，其在肿瘤发生机制、药物筛选及免疫治疗（如GD2抗体）研究中具有不可替代的作用。

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二、标准化操作流程
1. 细胞复苏

• 快速解冻：37℃水浴中轻柔晃动冻存管，90秒内完成（冰晶残余＜50%时移出水浴）

• 梯度稀释：1ml冻存液+9ml预温培养基→离心（200g × 5min）→弃上清

• 关键操作：沉淀用新鲜培养基重悬，接种于胶原包被的培养瓶（密度≥1×10⁴ cells/cm²）

2. 培养体系

3. 传代操作

• 弃旧液 → PBS清洗 → 0.05%胰酶（含EDTA）消化3-5分钟

• 中和关键：加入2倍胰酶体积的含血清培养基

• 轻柔吹打（<10次）→ 离心后重悬接种

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三、关键质控要点
▶ 防污染黄金法则

• 超净台紫外灭菌≥30min，移液器乙醇擦拭

• 所有操作在火焰无菌区域内进行

• 培养基添加双抗（青霉素100U/ml + 链霉素100μg/ml）

▶ 异常处理（生长问题）

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四、细胞保藏与鉴定
• 冻存流程

1. 对数生长期细胞（>90%活率）

2. 冻存液配方：90% FBS + 10% DMSO

3. 程序降温：4℃(30min) → -20℃(2h) → -80℃(过夜) → 液氮

• 权威鉴定

• STR分型：每3个月检测1次（参照ATCC数据库）

• MYCN检测：FISH确认扩增状态（区别于SH-SY5Y细胞）

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五、多领域应用场景

1. 靶向治疗研发：GD2抗体药物敏感性测试

2. 耐药机制研究：ALDH1A2基因介导的化疗抵抗

3. 肿瘤代谢：MYCN调控的糖酵解通路验证

4. 细胞疗法评估：CAR-T细胞杀伤效能检测

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六、常见问题解答
Q：传代后细胞团块聚集怎么办？
→ 优化消化：采用Accutase替代胰酶，37℃处理8-10分钟

Q：如何避免自发分化？
→ 控制传代密度＞80%，缩短培养周期至72小时内。

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