Mahlavu人肝癌细胞全攻略：从高效复苏到前沿应用的黄金指南

        Mahlavu人肝癌细胞是肝癌研究中的重要体外模型，广泛应用于肿瘤生物学、药物筛选及分子机制研究等领域。作为一株来源于人肝癌组织的细胞系，其培养与保藏需严格遵循标准化流程。本文将系统介绍Mahlavu细胞的复苏培养、污染防控、冻存方法及鉴定策略，并解析其应用价值。

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一、Mahlavu细胞的复苏与培养操作指南

1. 复苏步骤

• 快速解冻：从液氮罐中取出冻存管，立即置于37℃水浴中轻柔摇晃至融化（约1分钟）。

• 去除冻存液：将细胞悬液转移至含5mL预温培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟，弃上清。

• 重悬接种：用新鲜培养基（含10% FBS的DMEM）重悬细胞，接种至培养瓶，置于37℃、5% CO₂培养箱。

• 首次换液：24小时后更换培养基，去除残留DMSO。

2. 培养条件优化

• 培养基：DMEM高糖培养基+10%胎牛血清（FBS）+1%双抗（青霉素/链霉素）。

• 传代方法：细胞融合度达80%-90%时，用0.25%胰酶消化2-3分钟，按1:3比例传代。

• 关键点：避免过度消化；传代后需观察贴壁情况（通常4-6小时）。

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二、培养注意事项与污染防控

1. 污染预防措施

• 无菌操作：全程在超净工作台内进行，穿戴实验服并消毒器械。

• 定期监测：每日观察培养基浑浊度及细胞形态变化（如空泡、脱落）。

• 分区域操作：细胞房与细菌培养区严格分离，避免交叉污染。

• 支原体检测：每2个月采用PCR或荧光染色法检测。

2. 常见问题处理

• 细菌污染：立即丢弃培养物，并用75%乙醇彻底消毒操作台。

• 真菌污染：污染培养瓶需高压灭菌处理，避免孢子扩散。

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三、Mahlavu细胞的冻存与保藏

1. 冻存流程

• 冻存液配制：含10% DMSO、90% FBS的冻存保护液。

• 细胞处理：取对数生长期细胞，离心后按1×10⁶/mL密度重悬于冻存液。

• 程序降温：使用程序降温盒（-1℃/分钟）或分阶段冻存（4℃ 30min → -20℃ 2h → -80℃过夜），最终转移至液氮罐。

2. 长期保藏要点

• 液氮罐管理：定期补充液氮，避免温度波动。

• 备份保存：同一批次细胞分装至多个冻存管，避免反复冻融。

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四、细胞鉴定与质量控制

1. 形态学鉴定：贴壁生长，多边形上皮样形态（图1）。

2. STR分析：通过短串联重复序列（STR）比对，确认细胞来源唯一性。

3. 功能验证：检测AFP（甲胎蛋白）表达水平，验证肝癌特性。

4. 核型分析：定期检查染色体异常情况。

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五、Mahlavu细胞的核心应用领域

1. 肝癌机制研究：探究致癌基因（如p53突变）与信号通路（Wnt/β-catenin）。

2. 抗肿瘤药物筛选：用于化疗药物（如索拉非尼）的敏感性测试。

3. 基因编辑模型：构建CRISPR-Cas9敲除株，研究靶基因功能。

4. 个性化医疗：联合患者来源类器官（PDO），模拟个体化治疗反应。

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六、总结与展望

Mahlavu细胞作为经典肝癌模型，其规范化的培养与冻存是研究可靠性的基石。未来，结合单细胞测序与3D培养技术，将进一步拓展其在肿瘤微环境研究中的应用。