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技术资料/正文
120 人阅读发布时间:2025-03-07 09:22
动物细胞培养的基础步骤
获取材料:从动物胚胎或幼龄动物的器官、组织中获取材料。
剪碎处理:将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理,形成单个细胞。
培养基配制:将处理后的细胞移入培养基中,配成一定浓度的细胞悬浮液。
细胞贴壁:悬浮液中的细胞会贴附在培养器皿壁上,形成细胞贴壁。
接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞会停止分裂增殖。
传代培养:将出现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶处理,再配成新的细胞悬浮液。
动物细胞培养所需的器皿
培养器皿:分为玻璃和塑料材质。玻璃材质易于清洗和重复使用,而塑料材质则价格便宜且一次性使用。常见的培养器皿有三种:
培养瓶:用于培养及繁殖细胞,置于95%空气与5%CO2混合气体的培养箱中进行培养。
培养皿:用于装取、分离、处理组织,以及进行细胞毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。
多孔培养板:用于各种检测实验,如细胞克隆及细胞毒性实验。不同颜色的多孔培养板有不同的用途。
操作器皿:用于实验室中的操作,包括贮液瓶、吸管和加样器。
贮液瓶:用于存放或配制培养用液体,如培养液、血清及试剂等。
吸管:分为刻度吸管和无刻度吸管,前者用于吸取、转移液体,后者用于吸取、转移液体、吹打、混匀及传代细胞。
移液器:又称加样器,用于吸取、移动液体或滴加样本。最好的是微量加样器,吸量准确、方便,可保证实验样品(或试剂)含量精确,重复性好。
其他用品:包括离心管(收集细胞)、试管(放置试剂)、玻璃容器(存放吸管)、贮槽(存放小件培养物品)、冻存管(冻存细胞),各种注射器、烧杯、量筒、漏斗、酒精灯等。
动物细胞培养的实践应用
原代培养:从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。
传代培养:当细胞从动植物中生长迁移出来,形成生长晕并增大后,将其分成若干份,接种到若干份培养基中,使其继续生长、增殖。
通过这些步骤和器皿的使用,可以进行有效的动物细胞培养,为科研和实验提供可靠的细胞来源。