UT-16人肾透明细胞癌细胞培养及售后处理

　　一、UT16细胞介绍

　　细胞名称人肾透明细胞癌细胞；UT16

　　形态特性上皮样

　　生长特性贴壁生长

　　特征特性VHL基因396位G＞A突变。

　　培养条件RPMI-1640+10%FBS

　　传代方法1:2~1:4传代；每周2~3次。

　　传代情况P18

　　冻存条件90%FBS+10%DMSO

　　支原体检测培养法（-）

　　STR Amelogenin：X,X；CSF1PO：11,12；D12S391：19,19；D13S317：11,12；D16S539：9,9；D18S51：16,21；D19S433：14.2,15；D21S11：28,29；D2S1338：23,24；D3S1358：15,15；D5S818：10,12；D6S1043：12,12；D7S820：8,12；D8S1179：12,14；FGA：24.2,25；Penta E：15,15；TH01：7,9；TPOX：8,14；vWA：18,18；

　　参考文献N/A

　　二、细胞培养步骤

　　细胞传代：如果未超过80%汇合度时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；如果细胞密度超80%，即可进行传代培养，传代具体步骤如下细胞传代：

　　a、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

　　方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

　　方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

　　b、细胞冻存：

　　1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，将T25培养瓶中的悬液收集至离心管中1000rpm

　　离心5min；

　　2、弃上清，沉淀细胞加入1ml/支无血清冻存液，混匀后加入冻存管中。（如：冻一支，加入1ml无血清冻存液即可）

　　3、将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

　　放24小时以上。

　　C、细胞复苏：

　　1、从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

　　2、将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

　　3、弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；

　　4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

　　注意事项：有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。

　　三、细胞收到后处理

　　培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是运输细胞的最好办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后放到超净台内严格无菌操作，将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处理。显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（最好40x,100x,200x各一张），前三天照片是重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。（注意密封培养瓶放入培养箱时要将盖子拧松，传代后建议一瓶用原瓶的完全培养基，另外一瓶用自己配的完全培养基，以便进行对比培养）